SEPT4、TEKT4基因與特發(fā)性弱精子癥關(guān)系的研究.pdf

1、背景與目的：
　　 近幾十年,全世界范圍內(nèi)育齡男性的精液質(zhì)量都存在著下降趨勢(shì),男性不育已是全世界面臨的重要問題,而男性精液質(zhì)量的下降主要體現(xiàn)在指標(biāo)精子活動(dòng)力低下。精子活力是指精子的前向運(yùn)動(dòng)能力,它是精子穿透宮頸粘液,到達(dá)受精部位,穿透放射冠和透明帶,進(jìn)入卵細(xì)胞的胞漿,完成受精全過程的重要條件。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)根據(jù)精子的前向運(yùn)動(dòng)能力,將精子分為a、b、c、d四級(jí),其中a級(jí)≥

2、25％或(a+b)級(jí)＞50%為精子活力正常,而低于此標(biāo)準(zhǔn)即為弱精子癥(Asthenozoospermia,AZS)。AZS是造成男性低生育力和不育的主要原因之一。據(jù)報(bào)道[1],大約24%的低生育力男性是由于AZS引起的,另外55%的低生育力男性患者合并精液異常、精子活力低下、精子形態(tài)異常。引起弱精子癥的機(jī)制也很復(fù)雜,主要涉及精子能量代謝的異常、信號(hào)傳導(dǎo)通路的異常以及精子運(yùn)動(dòng)結(jié)構(gòu)的異常等。
　　 由于精子的運(yùn)動(dòng)主要是靠精子鞭毛的擺

3、動(dòng)實(shí)現(xiàn)的,因此分析精子鞭毛的結(jié)構(gòu)特征并探討弱精子癥的病因及其發(fā)生機(jī)制,為低生育男性提供有效合理的臨床治療策略尤為重要。精子鞭毛是精子的主要組成部分之一,主要由軸絲、外周致密纖維(outer dense fibers,ODFs)和線粒體鞘(mitochondrial sheath,MS)等組成。目前研究發(fā)現(xiàn),大約有250多種精子鞭毛軸絲及其附屬結(jié)構(gòu)的基因參與精子運(yùn)動(dòng)這一生理過程,它們的突變或表達(dá)異常均可引起精子鞭毛結(jié)構(gòu)和功能的紊亂,導(dǎo)致精

4、子運(yùn)動(dòng)障礙和活力低下[2-3]。
　　 為更深入地了解AZS的發(fā)生機(jī)制,本研究采用逆轉(zhuǎn)錄.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)、免疫細(xì)胞化學(xué)以及Western印跡技術(shù),探討精子鞭毛基因SEPT4、TEKT4與特發(fā)性弱精子癥發(fā)生機(jī)制的關(guān)系,從而為臨床對(duì)特發(fā)性弱精子癥的可行性診斷和治療提供可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 1研究對(duì)象
　　 30份正常生育男性(年齡21-37歲)精液標(biāo)本來(lái)自于20

5、10年9月-2011年2月河南省人類精子庫(kù)合格的供精志愿者,精子密度≥60×106/ml,精子活力(a+b)級(jí)≥60%;32份特發(fā)性弱精子癥患者(年齡20-38歲)精液標(biāo)本來(lái)自于同期鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心男科門診的患者,精子密度≥20×106/ml,精子活力(a+b)級(jí)＜50%,分別組成為正常男性組和弱精子癥組。
　　 2方法2.1 RT-PCR
　　 采用RT-PCR方法,檢測(cè)SEPT4 mRNA和TEKT4

6、 mRNA在兩組精子中的表達(dá)。
　　 2.2 Western印跡
　　 采用Western印跡方法,檢測(cè)SEPT4蛋白和TEKT4蛋白在兩組精子中的表達(dá)。
　　 2.3免疫細(xì)胞化學(xué)
　　 采用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù),檢測(cè)SEPT4蛋自在兩組精子中的定位及表達(dá)。
　　 3統(tǒng)計(jì)處理
　　 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,數(shù)據(jù)以-x±s表示。弱精子癥組和正常男性組SEPT4、TEKT4表達(dá)之間

7、的比較采用兩獨(dú)立樣本t-檢驗(yàn)進(jìn)行分析;檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1兩組研究對(duì)象精子中SEPT4蛋白的定位與表達(dá)
　　 SEPT4蛋白在精子中定位于精子鞭毛的環(huán)結(jié)構(gòu),并且與正常男性組相比,特發(fā)性弱精子癥患者精子中SEPT4蛋白表達(dá)量的差異具有顯著意義(t=3.452,P=0.001)。
　　 2兩組研究對(duì)象精子中SEPT4 mRNA的表達(dá)
　　 弱精子癥組精子中SEPT4 mRNA

8、表達(dá)量與正常男性組相比顯著降低,差異具有顯著意義(t=3.521,P=0.001)。
　　 3兩組研究對(duì)象精子中SEPT4蛋白的表達(dá)
　　 弱精子癥組精子中SEPT4蛋白的表達(dá)水平與正常男性組相比顯著降低,差異具有顯著意義(t=5.872,P=0.001)。
　　 4兩組研究對(duì)象精子中TEKT4 mRNA的表達(dá)
　　 TEKT4 mRNA在弱精子癥組精子中的表達(dá)量與正常男性組相比顯著降低(t=4.325,