丹參對(duì)大鼠脊髓缺血再灌注損傷的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 通過觀察丹參及丹參酮對(duì)大鼠脊髓缺血再灌注損傷脊髓組織中水含量、Ca2+濃度、細(xì)胞色素C、半胱氨酸蛋白酶-3及脊髓組織病理變化的影響,探討其對(duì)脊髓缺血再灌注損傷的作用及機(jī)制,為臨床防治脊髓缺血再灌注損傷提供新的思路及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:
　　 ①清潔級(jí)健康Sprague-Dawley大鼠160只,雌雄不限,體重270±10g,由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,采用張俐等[1]改進(jìn)

2、法制備大鼠脊髓缺血再灌注損傷模型,隨機(jī)分為:假手術(shù)對(duì)照組(A組40只)、單純?nèi)毖俟嘧⒔M(B組40只)、丹參干預(yù)組(C組40只)、丹參酮干預(yù)組(D組40只)。丹參干預(yù)組及丹參酮干預(yù)組:分別術(shù)前半小時(shí)腹腔注射丹參注射液、丹參酮Ⅱa磺酸鈉注射液;單純?nèi)毖俟嘧⒔M:不注射任何藥物,其余同前面二組;假手術(shù)組:麻醉和手術(shù)操作同前面三組,但不阻斷腹主動(dòng)脈即終止手術(shù),室溫下自然蘇醒。均于造模后0.5h、1h、4h、8h、12h時(shí)間點(diǎn)取L2-L5脊髓。

3、
　　 ②采用干濕法計(jì)算脊髓組織中含水量的變化、原子吸收光譜法檢測(cè)Ca2+濃度的變化、免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)脊髓神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞色素C的釋放、RT-PCR技術(shù)檢測(cè)脊髓神經(jīng)細(xì)胞半胱氨酸蛋白酶-3的表達(dá)及HE染色光鏡觀察脊髓組織病理變化。
　　 ③利用Spss15.0統(tǒng)計(jì)分析軟件和圖像處理系統(tǒng)對(duì)所得的數(shù)據(jù)和圖像進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果:
　　 ①采用張俐等[1]改進(jìn)法制作脊髓缺血再灌注損傷模型,缺血完全、重復(fù)性好

4、、可操作性強(qiáng),經(jīng)濟(jì)實(shí)用。
　　 ②假手術(shù)組脊髓組織中含水量、Ca2+濃度均沒有明顯的變化,脊髓神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞色素C未見釋放,半胱氨酸蛋白酶-3未見表達(dá),與單純?nèi)毖俟嘧⒔M、丹參及丹參酮干預(yù)組各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比,有顯著性差異(P＜0.05);單純?nèi)毖俟嘧⒔M半胱氨酸蛋白酶-3的表達(dá)顯著升高,細(xì)胞色素C的釋放明顯增加,并產(chǎn)生大量的Ca2+,缺血再灌注損傷后脊髓組織明顯水腫,含水量可達(dá)74.51％,單純?nèi)毖俟嘧⒔M與假手術(shù)組各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)觀

5、測(cè)相比有非常顯著性差異(P＜0.01),與丹參及丹參酮干預(yù)組各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)觀測(cè)相比有顯著性差異(P＜0.05);丹參及丹參酮干預(yù)組半胱氨酸蛋白酶-3的表達(dá)明顯降低,細(xì)胞色素C的釋放顯著被抑制,細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量明顯減少,脊髓組織水腫得到顯著改善,水含量顯著減少,與假手術(shù)組及單純?nèi)毖俟嘧⒔M各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)觀測(cè)相比有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 ①張俐等[1]改進(jìn)法制備脊髓缺血再灌注損傷模型,重復(fù)性好,缺血完

6、全,可操作性強(qiáng),是研究脊髓缺血再灌注損傷的理想模型,值得推廣應(yīng)用。
　　 ②在脊髓缺血再灌注損傷中,鈣離子、細(xì)胞色素C、半胱氨酸蛋白酶-3均參與了脊髓缺血再灌注損傷的病理過程,丹參及丹參酮可明顯減輕脊髓缺血再灌注損傷引起的脊髓水腫,維持細(xì)胞內(nèi)鈣離子的平衡,減少線粒體釋放細(xì)胞色素C,抑制半胱氨酸蛋白酶-3的表達(dá),從而對(duì)脊髓缺血再灌注損傷有很好的保護(hù)作用。其保護(hù)作用及機(jī)制可能與降低脊髓含水量、降低鈣離子濃度、減少線粒體釋放細(xì)胞色素C