雷公藤多苷對(duì)痹證大鼠毒性反應(yīng)初步評(píng)價(jià).pdf

1、目的：
　　 以佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠作為痹證動(dòng)物模型,從血生化、病理學(xué)、免疫學(xué)以及代謝組的角度對(duì)雷公藤多苷引起痹證大鼠毒性反應(yīng)進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。
　　 方法：
　　 選用雄性SD大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,采用右后足趾皮下注射弗氏完全佐劑的方法,誘導(dǎo)出AA模型40只。40只.AA模型大鼠和40只正常大鼠,按照體重分別隨機(jī)分為4組,每組10只:模型空白對(duì)照組、模型低劑量組、模型中劑量組、模

2、型高劑量組和正?？瞻讓?duì)照組、正常低劑量組、正常中劑量組和正常高劑量組?？瞻捉M給予生理鹽水；低、中、高三個(gè)劑量分別灌服雷公藤多苷為7mg/kg(等同于人臨床治療量)、70mg/kg、105mg/kg,每天一次。觀測(cè)動(dòng)物體重及關(guān)節(jié)腫脹度等情況。給藥2周后處死動(dòng)物,取血進(jìn)行生化和血常規(guī)檢測(cè),測(cè)量脾臟、胸腺、肝臟、腎臟、睪丸、附睪和前列腺重量,計(jì)算各臟器系數(shù),并在光鏡下觀察踝關(guān)節(jié)和臟器的病理?yè)p傷情況。采用流式技術(shù)檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群變化。采用免疫

3、組化的方法觀察動(dòng)物睪丸組織中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、神經(jīng)型一氧化氮合成酶(nNOS)和誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)表達(dá)的情況,采用比色法檢測(cè)大鼠血漿iNOS、總抗氧化能力(TAOC)指標(biāo)變化,并采用代謝組學(xué)的方法檢測(cè)大鼠血漿中小分子代謝物質(zhì)的情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.踝關(guān)節(jié)腫脹度的測(cè)定結(jié)果顯示:
　　 模型組大鼠致炎側(cè)和繼發(fā)側(cè)踝關(guān)節(jié)腫脹度比正常組顯著增加；給藥后模型低劑量組大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹程度與

4、模型組比較有降低趨勢(shì)。
　　 2.臟器系數(shù)的測(cè)定結(jié)果顯示:
　　 肝臟系數(shù)的變化,模型組表現(xiàn)為隨著劑量增大升高,正常組無(wú)明顯改變；睪丸系數(shù)的變化,正常與模型兩組均表現(xiàn)為隨著劑量增大而降低。脾臟、腎臟、附睪和前列腺系數(shù),不符合廣義線性模型,兩組無(wú)可比性。
　　 3.生化和血常規(guī)測(cè)定結(jié)果顯示:
　　 對(duì)于天門冬氨酸轉(zhuǎn)換酶(AST),正常組隨著劑量增加有增大的趨勢(shì),模型組隨著劑量增加基本沒(méi)有變化；對(duì)于堿性磷酸酶

5、(ALP),隨著劑量的加大模型組有減小趨勢(shì),而正常組則有增大趨勢(shì)。對(duì)于肌酐(CRE),不同組不同給藥劑量時(shí)對(duì)CRE影響不明顯。對(duì)于尿酸(UAC),不同組不同給藥劑量造成UAC存在差異,尤其是在中劑量時(shí),正常組要明顯高于模型組；對(duì)于GLU,隨著劑量的加大模型組基本不變,而正常組則有增大趨勢(shì)。
　　 對(duì)于血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)、淋巴細(xì)胞數(shù)(LY)和紅細(xì)胞平均體積(MCV),不同組不同給藥劑量時(shí)對(duì)這些指標(biāo)影響

6、不明顯。對(duì)于血小板(PLT),不同組不同給藥劑量造成PLT存在差異,隨著劑量的加大正常組基本不變,而模型組則有增大趨勢(shì)。
　　 4.外周血T細(xì)胞亞群的檢測(cè)結(jié)果顯示:
　　 與模型組相比,正常組大鼠外周血中CD3存在差異——正常組隨著劑量增加有減小趨勢(shì),模型組隨著劑量增加基本沒(méi)有變化。
　　 5.睪丸組織中iNOS、eNOS以及nNOS陽(yáng)性細(xì)胞檢測(cè):
　　 在低劑量時(shí),正常組與模型組相比,無(wú)顯著性差異；中劑

7、量時(shí),睪丸組織eNOS和nNOS指標(biāo)表達(dá)模型組高于正常組,而iNOS表達(dá)則相反；高劑量時(shí),eNOS和nNOS指標(biāo)表達(dá),二者表達(dá)均顯著性減少,而iNOS表達(dá)顯著性增加。
　　 6.血漿中iNOS和T-AOC的檢測(cè)結(jié)果:
　　 對(duì)于iNOS,不符合廣義線性模型,故正常和模型兩組無(wú)可比性；對(duì)于TAOC,正常組隨著劑量增加有增大趨勢(shì),模型組隨著劑量增加基本沒(méi)有變化。
　　 7.代謝組檢測(cè)結(jié)果顯示:
　　 對(duì)于溶血

8、磷脂酰膽堿(LPC C16:0)和LPC C18:1,不同組不同給藥劑量時(shí)對(duì)二者影響均無(wú)明顯差異。對(duì)于熊去氧膽酸(UDCA)和鵝去氧膽酸(CDCA)兩者隨著劑量變化有下降趨勢(shì)。
　　 8.光鏡觀察結(jié)果顯示:
　　 關(guān)節(jié):與模型空白對(duì)照組相比,模型低劑量組關(guān)節(jié)的病理改變相對(duì)較輕。
　　 臟器:正常組大鼠肝臟未見(jiàn)異常,模型組大鼠出現(xiàn)病理改變。正常中、高劑量組和模型中、高劑量組均有腎臟病理改變,相同劑量下正常組較重。與

9、正常中劑量組相比,睪丸病理改變程度,模型中劑量組較輕；高劑量下兩組均有嚴(yán)重病理改變。
　　 結(jié)論
　　 1.雷公藤多苷治療劑量可以減輕AA大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹程度,發(fā)揮其藥效作用。同時(shí),其沒(méi)有表現(xiàn)出明顯毒性反應(yīng)。
　　 2.雷公藤多苷在正常中劑量組,部分指標(biāo)上表現(xiàn)出的毒性反應(yīng)高于模型中劑量組。
　　 3.雷公藤多苷正常高劑量組和模型高劑量組均表現(xiàn)出嚴(yán)重毒性反應(yīng),提示雷公藤多苷超過(guò)一定劑量時(shí),無(wú)論大鼠處于病理模型