番茄紅素通過EGFR抑制炎癥性氣道黏液高分泌的研究.pdf

1、目的:以人中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(Human neutrophil dastase，HNE)作為刺激物刺激氣道上皮細(xì)胞，在其形成的氣道黏液高分泌模型中，探索番茄紅素對病理型黏蛋白(Mucin，MUC)5ac的治療效果及具體信號通路的相關(guān)研究。
　　方法:將人支氣管上皮細(xì)胞株HBE16細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)后，將其分成7組，分別進(jìn)行如下處理，每組依次添加入濃度為0、25、50、75、100、200、400umol/L的番茄紅素，經(jīng)四甲基偶氮唑藍(lán)

2、光吸收法（Methylthiazolyl tetrazolium，MTT）觀察各組HBE16細(xì)胞的存活率，根據(jù)細(xì)胞存活率確定番茄紅素處理濃度。將HBE16細(xì)胞分成如下5組，予以番茄紅素及表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor，EGFR)抑制劑AG1478進(jìn)行干預(yù):①對照組;②HNE處理組(50nmol/L);③HNE（50nmol/L）+番茄紅素（100umol/L）處理組;④HNE(50nm

3、ol/L)+AG1478(5umol/L)處理組;⑤HNE(50nmol/L)+番茄紅素（100umol/L）+AG1478（5umol/L）處理組。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Reverse transcription-PCR，RT-PCR）方法檢測各組細(xì)胞中MUC5ac mRNA及EGFRmRNA的表達(dá)情況;以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測各組細(xì)胞中 MUC5ac

4、蛋白的分布情況，并運(yùn)用細(xì)胞免疫激光共聚焦顯微鏡進(jìn)一步觀察HNE16細(xì)胞經(jīng)番茄紅素作用前后各組細(xì)胞MUC5ac蛋白分布的差異情況;運(yùn)用Western Blot方法測得各組細(xì)胞中EGFR和p-EGFR蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:從MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果中看出，番茄紅素對HBE16細(xì)胞的抑制作用呈濃度依賴性，在番茄紅素濃度不大于100umol/L時，細(xì)胞未見明顯損傷，但當(dāng)番茄紅素濃度大于100umol/L時，隨著番茄紅素濃度升高，細(xì)胞貼壁比例明

5、顯上升，凋亡細(xì)胞顯著增多;從上述可知給予番茄紅素處理細(xì)胞濃度為100umol/L。HNE處理組中MUC5ac的mRNA和蛋白的吸光度面積積分值與對照組相比，有顯著升高，由激光共聚焦顯像觀察的MUC5ac蛋白結(jié)果也提示其較對照組有顯著增多，EGFR mRNA、EGFR蛋白及P-EGFR蛋白表達(dá)均明顯升高。HNE+番茄紅素處理組中MUC5ac mRNA及蛋白、EGFRmRNA及蛋白、P-EGFR蛋白較HNE處理組均明顯降低，由激光共聚焦顯像

6、觀察MUC5ac蛋白亦提示其表達(dá)有所下調(diào);而HNE+番茄紅素+AG1478組與HNE+AG1478處理組相對比，MUC5ac mRNA及蛋白、EGFRmRNA及蛋白、P-EGFR蛋白各組指標(biāo)下調(diào)作用更明顯。以上結(jié)果均經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法檢測差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:番茄紅素可以通過減少EGFR本身生成并且阻斷EGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而發(fā)揮對氣道黏液高分泌的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)同時也為番茄紅素針對慢性炎癥性氣道黏液高分泌相