高表達SERCA2a在大鼠心肌缺血再灌注損傷中的保護機制.pdf

1、目的：
　　研究提高心肌肌漿網(wǎng)鈣離子ATP酶（Sarcoplasmic reticulumCa2+-ATPase，SERCA2a）的表達在大鼠心肌缺血/再灌注（Myocardial ischemia-reperfusion,I/R）損傷中的保護作用及可能機制。
　　方法：
　　通過對Wistar大鼠受精卵原核內微量注入攜帶有SERCA2a cDNA的質粒PCAGGS-CCI，建立SERCA2a轉基因大鼠系。通過開胸結扎

2、大鼠心臟左冠狀動脈前降支30 min，再灌注24 h制備心肌缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）模型。設立組別分別為野生型對照組（WT）、野生型I/R組(WT+I/R)、轉基因型對照組（TG）、轉基因型I/R組（TG+I/R）。采用心功能分析系統(tǒng)檢測心室壓、動脈壓等各項指標；隨后取出心臟，采用Evans blue-triphenyltetrazolium chloride（TTC）染色法測定心肌組織梗死面積和缺

3、血面積；經(jīng)HE染色，觀察I/R之后各組的病理變化；Western blot檢測心肌組織中凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax及自噬相關蛋白Beclin-1和LC3B-II/LC3B-I的表達及變化。
　　結果：
　　1.心功能指標
　　心功能分析數(shù)據(jù)顯示，麻醉狀態(tài)下，TG組和WT組大鼠心功能雖然存在著差異，但均在正常范圍，經(jīng)過I/R處理之后，TG組心功能指標下降明顯低于W T組心功能下降（P<0.05）。
　　2. I

4、/R之后缺血面積與梗死面積的比較
　　TTC染色顯示，野生型和轉基因型大鼠心臟左冠狀動脈前降支結扎30 min再灌注24 h后，心肌組織缺血面積與左心室橫切面比值的平均值WT+I/R組與TG+I/R組并無顯著性差異（P>0.05）；梗死面積（infarction area）與缺血面積（isc he mia a rea）比值的平均值TG+I/R組顯著低于WT+I/R組（P<0.05），即在在結扎位置大體一致保證缺血面積相同的情況下由

5、缺血再灌注誘導的心肌組織損傷，WT型大鼠顯著高于TG型大鼠。
　　3.各組I/R后的心肌病理變化
　　HE染色結果顯示，對照組的心肌纖維排列規(guī)則，心肌間未見異常。W T+I/R組胞質疏松、細胞間質空隙增大提示間質水腫且有炎性細胞浸潤。而TG+I/R組則心肌纖維排列相對規(guī)則，炎癥細胞浸潤相對較少。
　　4.凋亡相關蛋白和自噬相關蛋白
　　野生型與轉基因型大鼠I/R后凋亡相關蛋白和自噬相關蛋白的表達情況表明，生理狀態(tài)

6、下，TG組大鼠心肌組織中抗凋亡的 Bcl-2表達顯著低于 WT組大鼠（P<0.05），經(jīng)過I/R處理之后，TG組大鼠Bcl-2表達顯著增加（P<0.05），而WT組大鼠Bc l-2表達的變化不顯著（P>0.05）。而促凋亡蛋白Ba x的表達在生理狀態(tài)下，WT和TG組相比較差別不顯著（P>0.05），但缺血30 min再灌注24 h后TG組Bax的表達與TG對照組相比顯著下降（P<0.05）并且顯著低于WT+I/R組（P<0.05）。而B

7、cl-2/Bax的值則顯示在WT和TG型大鼠中，I/R處理組與相應的對照組相比均升高，但僅TG+I/R組具有顯著性差異（P<0.05），且比WT+I/R組升高的更加明顯（P<0.05）。在生理狀態(tài)下LC3B-II/LC3B-I的值在WT和 TG型大鼠心臟中表達無顯著差異（P>0.05），I/R之后TG+I/R組的LC3 B-II與LC3B-I的比值明顯高于 TG對照組（P<0.05）并且顯著高于 WT+I/R組（P<0.05）。而Bec