高糖和AGEs對內(nèi)皮細胞和MIN6細胞氧化應(yīng)激的影響.pdf

1、糖尿病是一種嚴重威脅人類健康的常見病，長期慢性高血糖使其成為人類致喪、致殘的主要原因。早期的血糖升高加重了細胞內(nèi)的代謝負荷，引起氧化應(yīng)激，產(chǎn)生過量活性氧（ROS），這一過程發(fā)生在胰腺β細胞可引起胰島素分泌異常，發(fā)生在血管內(nèi)皮細胞則引起內(nèi)皮的炎癥過程，從而導致糖尿病的慢性并發(fā)癥，但目前對高糖和高糖環(huán)境下形成的終末產(chǎn)物AGEs影響內(nèi)皮細胞和胰腺β細胞的確切機制尚不明確。本文分別從細胞活力、細胞內(nèi)ROS生成和NADPH氧化酶活性三個方面探討氧

2、化應(yīng)激的機制。 一. 高糖和糖化終末產(chǎn)物對內(nèi)皮細胞氧化應(yīng)激的影響 目的：研究糖化終末產(chǎn)物、持續(xù)高糖和波動性高糖對豬髂動脈內(nèi)皮細胞（PIEC）氧化應(yīng)激的影響，并以纈沙坦或氟伐他汀分別進行干預(yù)，觀察其對氧化應(yīng)激的可能保護作用。 方法：不同濃度高糖、AGEs伴/不伴纈沙坦或氟伐他汀干預(yù)PIEC一定時間后，MTT法檢測細胞活力變化，運用活性氧（ROS）捕獲劑雙氫溴乙啶（HE）、雙氫-乙酰乙酸二氯熒光黃（DCFH-DA）和

3、雙氫羅丹明123（DHR123）孵育細胞，通過熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)熒光、流式細胞儀檢測PIEC細胞的平均熒光強度（MFI）而測得細胞內(nèi)ROS水平。以光澤精（lucigenin）為化學發(fā)光試劑，通過化學發(fā)光檢測儀檢測加入NADPH后發(fā)光值的變化，反映高糖或AGEs對NADPH氧化酶活性的影響。 結(jié)果：高濃度葡萄糖或AGEs明顯抑制PIEC活力（P<0.05）；AGEs或高糖干預(yù)內(nèi)皮細胞后，細胞內(nèi)的MFI增加，NADPH氧化酶活性升

4、高（P<0.05）。纈沙坦或氟伐他汀能夠降低高糖或AGEs對細胞活力、MFI和酶活性的影響。波動性高糖較持續(xù)性高糖誘導細胞生成更多的ROS，二者均有NADPH氧化酶活性的升高，前者更甚，且差異顯著（P<0.05）。AGEs和高糖的聯(lián)合作用較二者單獨作用MFI增加，NADPH氧化酶活性更強（P<0.05）。細胞活力的下降、MFI和NADPH氧化酶活性與作用的濃度和時間呈正相關(guān)。 結(jié)論：高糖或AGEs可誘導PIEC發(fā)生氧化應(yīng)激，其對

5、細胞的損傷作用可能與氧自由基生成過多、ROS蓄積有關(guān)，該效應(yīng)與NADPH氧化酶活性升高有關(guān)，且波動性高糖的作用較持續(xù)性高糖強；波動范圍大者較波動范圍小者強；AGEs和高糖的聯(lián)合作用較各自的單獨作用強。纈沙坦或氟伐他汀通過降低NADPH氧化酶活性減少PIEC的ROS過多生成。 二. 高糖和糖化終末產(chǎn)物對MIN6細胞氧化應(yīng)激的影響 目的：研究高糖和糖化終末產(chǎn)物對胰島分泌細胞氧化應(yīng)激的影響。 方法：不同濃度高糖和AGE

6、s干預(yù)MIN6細胞一定時間后，MTT法檢測細胞活力變化，運用ROS捕獲劑雙氫溴乙啶（HE）、雙氫-乙酰乙酸二氯熒光黃（DCFH-DA）和雙氫羅丹明123（DHR123）孵育細胞，通過熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)熒光、流式細胞儀檢測MIN6細胞的MFI而測得細胞內(nèi)ROS水平。通過發(fā)光試劑光澤精，在化學發(fā)光檢測儀上檢測加入NADPH后發(fā)光值的變化，反映NADPH氧化酶活性。 結(jié)果：高糖或AGEs干預(yù)MIN6后，細胞活力明顯被抑制（P< 0.