2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:我們的前期研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)自噬介導(dǎo)了缺血預(yù)適應(yīng)的神經(jīng)保護(hù)作用,本研究旨在探索在神經(jīng)細(xì)胞缺血預(yù)適應(yīng)模型中,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶GRP78與自噬激活之間的內(nèi)在聯(lián)系。
  方法:培養(yǎng)大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤(pheochromocytoma cells,PC12 cells)細(xì)胞系和原代鼠皮層神經(jīng)元,建立缺血預(yù)適應(yīng)(ischemic preconditioning,IPC)和缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivat

2、ion model,OGD)模型,預(yù)缺血前采用BAPTA(dibromo-1,2-bis(aminophenoxy)ethane N,N,N9,N9-tetraacetic acid,0.125-2μM)給藥抑制GRP78表達(dá),用siRNA干擾PC12細(xì)胞GRP78的表達(dá),并用慢病毒過(guò)表達(dá)GRP78蛋白建立GRP78穩(wěn)轉(zhuǎn)株。采用CCK8(Cell Counting Kit-8)法檢測(cè)細(xì)胞增殖力,免疫印跡和免疫熒光法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子伴侶

3、GRP78和自噬相關(guān)蛋白LC3、Beclin1、p-AMPK、p-mTOR以及p-p70S6K的變化,采用透射電鏡觀察自噬體的生成情況。
  結(jié)果:IPC對(duì)PC12細(xì)胞和原代神經(jīng)元OGD具有保護(hù)作用,神經(jīng)細(xì)胞經(jīng)IPC處理12h后,GRP78、LC3和Beclin1上調(diào),多層膜包裹的自噬體形成增加。用BAPTA抑制GRP78表達(dá),能夠取消IPC對(duì)OGD的保護(hù)作用,并降低IPC引起的GRP78、LC3、Beclin1、p-AMPK、p

4、-mTOR的升高。GRP78siRNA亦能取消IPC對(duì)OGD的保護(hù)作用,并降低IPC引起的LC3、Beclin1升高。相反,過(guò)表達(dá)GRP78能夠提高PC12細(xì)胞對(duì)OGD的耐受性,并增加LC3、Beclin1和p-AMPK的表達(dá),但降低p-mTOR、p-p70S6K1的表達(dá),然而,應(yīng)用GRP78siRNA處理過(guò)表達(dá)GRP78的穩(wěn)轉(zhuǎn)株,則完全取消了LC3、Beclin1、p-AMPK、p-mTOR和p-p70S6K1的變化。
  結(jié)論

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