不同種屬AECM的成分分析、比較及組織相容性的研究.pdf

1、目的: 尋找適宜的神經(jīng)移植物橋接受損神經(jīng)干使其結構重建和功能恢復是神經(jīng)科學領域內(nèi)多年來的研究目標。隨著組織工程學技術的發(fā)展，同種異體脫細胞神經(jīng)移植物獲得了很好的發(fā)展，它作為有生物活性的神經(jīng)替代物，具有良好的仿生性和組織相容性，移植后為軸突再生提供適宜的微環(huán)境，能夠有效促進神經(jīng)再生。然而，在臨床應用中，進行同種異體間神經(jīng)移植使供體的來源受到很大限制，異種神經(jīng)細胞外基質(zhì)材料能否作為適宜的移植物就成為亟待解決的問題。本實驗分析比較不同

2、種屬哺乳動物脫細胞神經(jīng)細胞外基質(zhì)材料(AECM)的組分和免疫原性，為解決臨床周圍神經(jīng)損傷修復神經(jīng)移植物的來源問題提供實驗依據(jù)。 材料與方法: 1、實驗動物 Wistar大鼠30只，SD大鼠8只，體重為200～250g；雜種犬8只，體重約16kg，均由中國醫(yī)科大學實驗動物部提供。 2、脫細胞神經(jīng)移植物的制備采用優(yōu)化的化學萃取脫細胞方法制備犬和大鼠AECM，另采用低滲-酶消化法制備大鼠AECM。 3、

3、觀察指標及檢測方法 (1)光、電鏡觀察AECM的形態(tài)結構。 (2)變色酸2R-亮綠染色觀察AECM中殘留的髓鞘碎片，半定量分析比較脫細胞神經(jīng)移植物中髓鞘碎片含量。 (3)免疫組織化學技術使AECM中保留的成分層粘連蛋白和殘留的施萬細胞標志物S-100蛋白顯像，半定量分析比較脫細胞神經(jīng)移植物中各成分含量。 (4)SDS-PAGE對比觀察AECM中P0、43kDa、65kDa等蛋白條帶。 (5)通過H

4、E染色對比觀察同種異體和異種AECM埋植于皮下的免疫排斥反應。 實驗結果: 1、采用優(yōu)化的化學萃取脫細胞方法制備的犬、大鼠AECM和低滲-酶消化法制備的大鼠AECM均較好地保留了基底膜管結構完整性。 2、髓鞘碎片染色強度在犬和大鼠AECM間無顯著性差異；在兩種脫細胞方法制備的大鼠AECM間無顯著性差異。 3、層粘連蛋白和S-100蛋白陽性物質(zhì)的積分光密度值在犬和大鼠AECM間無顯著性差異；在兩種脫細胞方法

5、制備的大鼠AECM間無顯著性差異。 4、采用優(yōu)化的化學萃取脫細胞方法制備的犬、大鼠AECM和低滲-酶消化法制備的大鼠AECM均保留較明顯的生長相關蛋白條帶，髓鞘蛋白條帶消失。 5、同種異體和異種AECM埋植后僅引起較弱的免疫排斥反應。 結論: 1、經(jīng)脫細胞處理后，不同種屬哺乳動物AECM均具有良好的仿生性和組織相容性。 2、采用優(yōu)化的化學萃取脫細胞方法和低滲-酶消化法制備的AECM均具有良好的仿生