論文牛主要組織相容性復合體(mhc)酶聯(lián)免疫分析

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3、啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊主要組織相容性復合體(majhistocompatibilitycomplexMHC)又稱主組織相容性復合基因又稱主組織相容性復合基因是存在于大部分脊椎動物基因組中的一個基因家族是存在于大部分脊椎動物基因組中的一個基因家族與免疫系統(tǒng)密切相關(guān)與免疫系統(tǒng)密切相關(guān).共分成兩共分成兩

4、...啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊

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9、聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用本試劑盒僅供研究使用產(chǎn)品編號：產(chǎn)品編號：CSBE11212b檢測范圍：檢測范圍：0.78ngml50ngml最低檢測限：最低檢測限：0.195ngml特異性：特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的牛MHC，且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應。有效期：有效期：6個月預期應用：預期應用：ELISA法定量測定牛血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中MHC含量。說明說明1試劑盒保存：2

10、0℃（較長時間不用時）；28℃（頻繁使用時）。2濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。3中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。4剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。概述概述主要組織相容性復合體（majhistocompatibilitycomplex，MHC），又稱主組織相容性復合基因，是存在于大部分脊椎動物基因組中的一個基因家族，與免疫系統(tǒng)密切相關(guān)。共分成

11、兩類：第一型：MHCclassI（MHCI）位于一般細胞表面上，可以提供一般細胞內(nèi)的一些狀況，比如該細胞遭受病毒感染，則相病毒外膜碎片的氨基酸鏈透過MHC提示在細胞外側(cè)，可以供殺手T細胞等辨識，以進行撲殺。第二型：MHCclassII（MHCII）只位于抗原提示細胞上，如巨噬細胞等。這類提供則是細胞外部的情況，像是組織中有細菌侵入，則巨噬細胞進行吞食后，把細菌碎片利用MHC提示給輔助T細胞，啟動免疫反應。實驗原理實驗原理用純化的抗體包被

12、微孔板，制成固相載體，往包被抗MHC抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗MHC抗體、HRP標記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的MHC呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制試劑盒組成及試劑配制1.酶聯(lián)板酶聯(lián)板(Assayplate)：一塊（96孔）。2.標準品標準品（Stard

13、）：2瓶(凍干品)。3.樣品稀釋液樣品稀釋液(SampleDiluent)：120ml瓶。4.生物素標記抗體稀釋液（生物素標記抗體稀釋液（BiotinantibodyDiluent）：110ml瓶。5.辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液（HRPavidinDiluent）：110ml瓶。6.生物素標記抗體（生物素標記抗體（Biotinantibody）：1120μl瓶（1：100）7.辣根過氧化物酶標記親和素（

14、辣根過氧化物酶標記親和素（HRPavidin）：1120μl瓶（1：100）不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃60分鐘。3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡12

15、分鐘，200μl每孔，甩干。4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液）100μl，37℃，60分鐘。5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡12分鐘，200μl每孔，甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前34孔有明顯的梯度藍色，后34孔顯色不明顯，即可終止）。7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應盡量與底

16、物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。注：1.用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。2.每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。3.為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或

17、覆膜。4.未使用完的酶標板或者試劑，請于28℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。5.建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。洗板方法洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，

18、浸泡12分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。計算計算以標準物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項注意事項1.當混合蛋白溶液時應盡量