DPP-IV抑制劑西格列汀對(duì)高糖狀態(tài)下腎小管上皮細(xì)胞p38MAPK通路的影響.pdf

1、目的：
　　1.觀察所培養(yǎng)的大鼠腎小管上皮細(xì)胞（NRK-52E）的形態(tài)，掌握培養(yǎng)細(xì)胞的基本過(guò)程。
　　2.研究西格列汀對(duì)高糖誘導(dǎo)下腎小管上皮細(xì)胞p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信號(hào)通路的影響,進(jìn)一步探討DPP-Ⅳ抑制劑西格列汀對(duì)糖尿病腎病可能的作用機(jī)制。
　　方法：
　　將NRK-52E復(fù)蘇在含10％FCS的DMEM低糖培養(yǎng)基中，放入條件為37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)，待NRK-52E生長(zhǎng)絕大

2、部分融合時(shí)，換用不含F(xiàn)CS的DMEM低糖培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后分組。
　　將同步后的NRK-52E分為:正常糖組、高滲組、高糖組、p38MAPK通路抑制劑（SB202190）+高糖組、西格列汀干預(yù)+高糖組,采用Western blot印跡檢測(cè)p38MAPK信號(hào)通路的活化情況；PCR檢測(cè)促凋亡因子bax mRNA與抗凋亡因子bcl-2 mRNA相對(duì)量比值；流式細(xì)胞法檢測(cè)同一時(shí)刻N(yùn)RK-52E凋亡率、凋亡蛋白caspase3、凋亡相關(guān)因子

3、bax與bcl-2的比值。
　　結(jié)果：
　　1.Western blot檢測(cè)到正常糖組以及高滲組磷酸化p38表達(dá)很少；而高糖可引起NRK-52E細(xì)胞 p38MAPK信號(hào)通路的活化，磷酸化p38蛋白表達(dá)明顯增多；在應(yīng)用 p38MAPK特異性抑制劑 SB202190后，25mmol/L高糖環(huán)境NRK-52E細(xì)胞p38MAPK通路的活化明顯減少；西格列汀亦有同樣的作用，可減少25mmol/L高糖刺激所引起的p38MAPK通路的活化

4、，減少其下游p38磷酸化蛋白的表達(dá)。
　　2.PCR檢測(cè)可見(jiàn)高糖組細(xì)胞bax mRNA/bcl-2 mRNA較正常組和高滲透壓組明顯增加；SB202190組細(xì)胞bax mRNA/bcl-2 mRNA較高糖組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；西格列汀組細(xì)胞bax mRNA/bcl-2 mRNA較高糖組也下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.流式細(xì)胞法檢測(cè)到25mmol/L高糖刺激12h、24h、48h均可

5、見(jiàn)NRK-52E細(xì)胞凋亡，24h出現(xiàn)凋亡明顯增加，以48h最為明顯。48h高糖組細(xì)胞凋亡率為（17.5±0.35）%，顯著高于正常組（4.8±0.24）%和高滲組（5.2±0.32）%；SB202190組細(xì)胞凋亡率為（11.3±0.19）%，較高糖組明顯下降35%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；西格列汀組NRK-52E凋亡率為（14.2±0.31）%，較高糖組下降19%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.05)。高糖組凋亡蛋白caspas

6、e3的表達(dá)率為（28.1±0.53）%，顯著高于正常組（2.7±0.13）%和高滲組（3.2±0.20）%；SB202190組caspase3的表達(dá)率為（14.6±1.25）%，較高糖組下降40%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.05)；西格列汀組NRK-52E caspase3的表達(dá)率為（20.9±0.87）%，較高糖組下降25%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.05)。
　　高糖（濃度25mmol/L）刺激48h后NRK-52E細(xì)胞

7、bax/bcl-2為（2.87±0.25），顯著高于正常組（0.41±0.17）和高滲組（0.42±0.13）；SB202190組 bax/bcl-2為（0.70±0.16），較高糖組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.05)；西格列汀組NRK-52E細(xì)胞 bax/bcl-2為（0.78±0.21），較高糖組下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.高糖狀態(tài)下腎小管上皮細(xì)胞p38MAPK通路活化，