天麻素和黃芩素作為佐劑對抗原提呈細(xì)胞及黑色素瘤小鼠CTL的作用研究.pdf

1、目的：腫瘤一直威脅著人類健康，由于其發(fā)病率和致死率較高，因此加深對腫瘤的發(fā)生機(jī)制和免疫學(xué)的研究有利于開發(fā)出有效的治療手段。通過注射疫苗來提高機(jī)體免疫力是預(yù)防疾病的手段之一，但傳統(tǒng)疫苗免疫原性弱，相對較難引起免疫反應(yīng)。天麻和黃芩是兩種中藥材，其有效成分天麻素和黃芩素有多種藥理作用，并且在《本草綱目》中有天麻素?zé)o毒的記載。但其是否可以作為免疫佐劑來增強(qiáng)免疫原性還未見報道，所以，我們主要通過天麻素的體內(nèi)和體外實驗來研究天麻素是否具有增強(qiáng)免疫原

2、性的作用；并將黃芩素作為佐劑來評價黃芩素對抗原提呈細(xì)胞的免疫增強(qiáng)作用。從實驗室的角度為促進(jìn)臨床腫瘤免疫治療的發(fā)展和進(jìn)步提供一條可行的思路。
　　方法：在體外，檢測天麻素和黃芩素素對DC2.4和RAW264.7細(xì)胞的刺激活性，在體內(nèi)，檢測天麻素和黃芩素對抗原提呈細(xì)胞的免疫增強(qiáng)活性，并建立小鼠黑色素瘤模型，檢測天麻素作為佐劑對荷瘤小鼠CTL的作用。在體外實驗中，我們將LPS作為陽性對照，不同濃度的天麻素和黃芩素分別刺激DC2.4細(xì)胞系

3、和RAW264.7細(xì)胞系，培養(yǎng)48h后用抗體進(jìn)行染色，用流式細(xì)胞儀檢測兩種細(xì)胞表面蛋白CD80，CD86，MHC I和MHC II的表達(dá)量變化；在體內(nèi)實驗中，我們分別做了天麻素作為佐劑對黑色素瘤小鼠CTL的作用研究和黃芩素作為佐劑對抗原提呈細(xì)胞的作用研究，在天麻素作為佐劑的研究中，我們將C57BL/6小鼠分為6組，每組10只，以弗式完全佐劑與滅活的B16F10腫瘤細(xì)胞作為陽性對照，以滅活的B16F10腫瘤細(xì)胞為陰性對照，以天麻素與滅活的

4、腫瘤細(xì)胞作為實驗組對 C57BL/6小鼠進(jìn)行免疫，免疫3d后對其天然免疫效果進(jìn)行評價，并建立小鼠黑色素瘤模型，對T細(xì)胞的殺傷功能進(jìn)行評價，最后，綜合小鼠的腫瘤大小及存活率來評價天麻素作為佐劑的效果；在黃芩素作為佐劑的研究中，我們將C57BL/6小鼠分為8組，每組10只，以黃芩素與滅活的腫瘤細(xì)胞作為實驗組對 C57BL/6小鼠進(jìn)行免疫，免疫3d后對小鼠脾臟細(xì)胞中的抗原提呈細(xì)胞表面蛋白及分泌的細(xì)胞因子進(jìn)行檢測，綜合體外結(jié)果，評價黃芩素對抗原

5、提呈細(xì)胞的激活作用。
　　結(jié)果：體外流式檢測結(jié)果顯示，天麻素和黃芩素有較強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞激活作用；體內(nèi)結(jié)果顯示，天麻素和黃芩素對抗原提呈細(xì)胞表面標(biāo)志物和胞內(nèi)細(xì)胞因子的表達(dá)有增強(qiáng)作用，并且天麻素能激活CD4+T細(xì)胞，并使其高表達(dá)細(xì)胞因子IL-2和 IFN-γ，激活CD8+T細(xì)胞，使其高表達(dá)細(xì)胞因子perforin，TNF-a和IFN-γ。
　　結(jié)論：天麻素能夠提高T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，并顯著提高了荷瘤小鼠的存活時間；天麻素因其