雞CLOCK基因在空腸彎曲桿菌感染中的表達(dá)調(diào)控及其多態(tài)性分析.pdf

1、CLOCK基因作為調(diào)控晝夜節(jié)律現(xiàn)象的核心基因之一，對(duì)維持正常的晝夜節(jié)律和機(jī)體的穩(wěn)態(tài)起著關(guān)鍵作用。空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni，C.jejuni)是“人畜共患病”的人類食源性病原菌，世界衛(wèi)生組織已將該菌列為最常見的食源性傳染病源之一。為了了解CLOCK基因的多態(tài)性和雞CLOCK基因在空腸彎曲桿菌感染中的表達(dá)調(diào)控作用，本研究從分子水平上了解雞CLOCK基因的遺傳變異和空腸彎曲桿菌感染雞后CLOCK基因的表達(dá)以及在不

2、同組織中CLOCK基因的表達(dá)差異。為雞的抗病育種工作提供理論參考依據(jù)。
　　 試驗(yàn)選用2個(gè)商業(yè)品種（AA肉雞、海蘭褐蛋雞）和4個(gè)山東地方品種（壽光雞、濟(jì)寧百日雞、魯西斗雞、汶上蘆花雞）為試驗(yàn)材料，每個(gè)品種60個(gè)個(gè)體，共360個(gè)個(gè)體。利用DNA直接測(cè)序法對(duì)雞CLOCK基因全序列進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)。結(jié)果在外顯子上共檢測(cè)到5處多態(tài)性位點(diǎn);4處為同義突變，1處為缺失;其中位于第18外顯子上的突變?yōu)樾掳l(fā)現(xiàn)的突變位點(diǎn)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果針對(duì)新發(fā)現(xiàn)的突

3、變位點(diǎn)對(duì)6個(gè)群體進(jìn)行基因分型，不同基因型在6個(gè)不同雞群體間的分布存在差異。
　　 動(dòng)物試驗(yàn)選用1日齡濟(jì)寧百日雞和白來(lái)航SPF雞（SPF雞）各84只為試驗(yàn)素材，按照品種隨機(jī)將雞分別分為兩個(gè)組，試驗(yàn)組（28只）和對(duì)照組（56只），飼養(yǎng)于隔離器中。在3日齡時(shí)口服接種500μl濃度為1.0×108cfu/ml的空腸彎曲桿菌菌液，同時(shí)對(duì)照組的每只雞口服接種等量的無(wú)菌PBS溶液。接種后的4h、8h、12h、16h、20h、24h和48h取盲

4、腸內(nèi)容物、盲腸和脾臟，測(cè)定試驗(yàn)動(dòng)物空腸彎曲桿菌陽(yáng)性率、盲腸內(nèi)容物中空腸彎曲桿菌含菌量和CLOCK基因表達(dá)量。結(jié)果如下:
　　 (1)對(duì)照組空腸彎曲桿菌檢測(cè)均呈陰性，濟(jì)寧百日雞試驗(yàn)組均呈陽(yáng)性，空腸彎曲桿菌含量逐漸降低;SPF雞試驗(yàn)組陽(yáng)性率先下降后上升。
　　 (2)接種空腸彎曲桿菌后，試驗(yàn)組和對(duì)照組在4h、8h、12h、16h、20h、24h時(shí)CLOCK基因在盲腸和脾臟中的表達(dá)量差異顯著或極顯著(P＜0.05);48h時(shí)濟(jì)

5、寧百日雞盲腸表達(dá)量差異不顯著，SPF雞盲腸、脾臟和濟(jì)寧百日雞脾臟表達(dá)量差異顯著(P＜0.05)。
　　 (3)對(duì)照組的SPF雞和濟(jì)寧百日雞在8h和20h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)盲腸CLOCK基因表達(dá)量差異均顯著(P＜0.05)，在12h、24h、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)差異均極顯著(P＜0.01)。試驗(yàn)組的SPF雞和濟(jì)寧百日雞在8h、12h、16h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)盲腸CLOCK基因表達(dá)量差異均顯著(P＜0.05)，在4h、24h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)盲腸CLO

6、CK基因表達(dá)量差異均極顯著(P＜0.01)。
　　 (4)對(duì)照組的SPF雞和濟(jì)寧百日雞在4h時(shí)間點(diǎn)時(shí)脾臟CLOCK基因表達(dá)量差異均顯著(P＜0.05)，在8h、12h、20h、24h、48h五個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)CLOCK基因表達(dá)量差異均極顯著(P＜0.01);試驗(yàn)組的SPF雞和濟(jì)寧百日雞在4h、12h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)脾臟CLOCK基因表達(dá)量差異均顯著(P＜0.05)，在8h、16h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)時(shí)脾臟CLOCK基因表達(dá)量差異均極顯著(P＜0.0