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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
尿酸是嘌呤代謝的最終產(chǎn)物,是體內(nèi)強(qiáng)大的抗氧化劑,同時(shí)在某些因素和條件下,又發(fā)揮著促氧化作用,因此其在機(jī)體中的作用非常復(fù)雜。臨床研究顯示,尿酸與胰島素抵抗、肥胖、糖尿病等代謝性疾病密切相關(guān),而目前缺乏相關(guān)的直接證據(jù)。骨骼肌源性胰島素抵抗在疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用,其中Irisin是新近發(fā)現(xiàn)的骨骼肌因子,而GLUT4是研究比較充分的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,在胰島素抵抗中起關(guān)鍵作用的因子。本研究通過(guò)觀察尿酸及葡萄糖刺激小鼠C2
2、C12細(xì)胞Irisin、GLUT4表達(dá)變化,以初步探討尿酸對(duì)骨骼肌胰島素抵抗的作用。
方法:
體外培養(yǎng)小鼠C2C12細(xì)胞,根據(jù)不同處理因素分為尿酸組和葡萄糖組:尿酸組共6組:0mM,0.1mM,0.2mM,0.3mM,0.4mM,0.6mM;葡萄糖組共3組:5.5mM,15mM,25mM。處理時(shí)間分別為0、24小時(shí)、48小時(shí)。
1.應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度
3、尿酸刺激C2C12后細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4mRNA及蛋白表達(dá)。
2.不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度尿酸對(duì)C2C12分泌Irisin的影響:應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞上清液中的Irisin含量。
3.應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度葡萄糖刺激C2C12后細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4mRNA及蛋白表達(dá)。
4.不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度葡萄糖對(duì)C2C12分泌Irisin的影響
4、:應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞上清液中的Irisin含量。
5.初步機(jī)制探討:應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)分別檢測(cè)尿酸、葡萄糖刺激C2C12細(xì)胞 PGC-1αmRNA和蛋白的表達(dá)水平。
6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用 SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±s)表示。兩組以上比較采用單因素方差分析(ANOVA)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果:
1.尿酸組C
5、2C12細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4mRNA及蛋白表達(dá):尿酸處理C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí),Irisin、GLUT4mRNA及蛋白的表達(dá)程度均呈先升高后降低的趨向,在0.3mM時(shí)達(dá)高峰,隨后降低,24小時(shí)處理組趨勢(shì)更明顯,與正常對(duì)照組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。
2.尿酸組C2C12分泌Irisin ELISA檢測(cè)結(jié)果:不同濃度尿酸處理小鼠C2C12細(xì)胞24小時(shí)后,Irisin分泌量先升高后降低,在0.
6、3mM時(shí)達(dá)高峰,隨后逐漸下降,與正常對(duì)照組(NC)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);以不同濃度尿酸處理小鼠C2C12細(xì)胞48小時(shí)后,各處理組Irisin的含量無(wú)明顯變化;差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
3.尿酸組 C2C12細(xì)胞內(nèi) PGC-1αmRNA及蛋白表達(dá):不同濃度尿酸處理 C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后,PGC-1αmRNA及蛋白的表達(dá)水平均呈先升高后降低的趨勢(shì),在0.4mM時(shí)達(dá)高峰,隨后逐漸下降,24小
7、時(shí)處理組趨勢(shì)更明顯,與正常對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。
4.葡萄糖組C2C12細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4mRNA及蛋白表達(dá):不同濃度葡萄糖處理C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后,Irisin、GLUT4mRNA及蛋白的表達(dá)水平均呈逐漸降低的趨勢(shì),與正常對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。
5.葡萄糖組C2C12分泌Irisin ELISA結(jié)果:以不同濃度葡萄糖處理C2C12細(xì)胞24
8、小時(shí)及48小時(shí)后,Irisin的分泌量逐漸降低,與正常對(duì)照組(NC)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
6.葡萄糖組C2C12細(xì)胞內(nèi)PGC1-α mRNA及蛋白的表達(dá):不同濃度葡萄糖處理小鼠C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后,PGC1-αmRNA及蛋白的表達(dá)水平均呈逐漸降低的趨勢(shì),與正常對(duì)照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。
結(jié)論:
1.尿酸對(duì)C2C12細(xì)胞表達(dá)Irisin、GLUT4的影響
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