尿酸、葡萄糖對(duì)小鼠成肌細(xì)胞Irisin、GLUT4表達(dá)的影響及初步機(jī)制探討.pdf

1、目的：
　　尿酸是嘌呤代謝的最終產(chǎn)物，是體內(nèi)強(qiáng)大的抗氧化劑，同時(shí)在某些因素和條件下，又發(fā)揮著促氧化作用，因此其在機(jī)體中的作用非常復(fù)雜。臨床研究顯示，尿酸與胰島素抵抗、肥胖、糖尿病等代謝性疾病密切相關(guān)，而目前缺乏相關(guān)的直接證據(jù)。骨骼肌源性胰島素抵抗在疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用，其中Irisin是新近發(fā)現(xiàn)的骨骼肌因子，而GLUT4是研究比較充分的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在胰島素抵抗中起關(guān)鍵作用的因子。本研究通過(guò)觀察尿酸及葡萄糖刺激小鼠C2

2、C12細(xì)胞Irisin、GLUT4表達(dá)變化，以初步探討尿酸對(duì)骨骼肌胰島素抵抗的作用。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)小鼠C2C12細(xì)胞，根據(jù)不同處理因素分為尿酸組和葡萄糖組：尿酸組共6組：0mM，0.1mM，0.2mM，0.3mM，0.4mM，0.6mM；葡萄糖組共3組：5.5mM，15mM，25mM。處理時(shí)間分別為0、24小時(shí)、48小時(shí)。
　　1.應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度

3、尿酸刺激C2C12后細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4mRNA及蛋白表達(dá)。
　　2.不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度尿酸對(duì)C2C12分泌Irisin的影響：應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞上清液中的Irisin含量。
　　3.應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度葡萄糖刺激C2C12后細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4mRNA及蛋白表達(dá)。
　　4.不同時(shí)間點(diǎn)、不同濃度葡萄糖對(duì)C2C12分泌Irisin的影響

4、：應(yīng)用ELISA技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞上清液中的Irisin含量。
　　5.初步機(jī)制探討：應(yīng)用RT-qPCR技術(shù)、Western Blot技術(shù)分別檢測(cè)尿酸、葡萄糖刺激C2C12細(xì)胞 PGC-1αmRNA和蛋白的表達(dá)水平。
　　6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用 SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±s)表示。兩組以上比較采用單因素方差分析（ANOVA）。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.尿酸組C

5、2C12細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4mRNA及蛋白表達(dá)：尿酸處理C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)，Irisin、GLUT4mRNA及蛋白的表達(dá)程度均呈先升高后降低的趨向，在0.3mM時(shí)達(dá)高峰，隨后降低，24小時(shí)處理組趨勢(shì)更明顯，與正常對(duì)照組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。
　　2.尿酸組C2C12分泌Irisin ELISA檢測(cè)結(jié)果：不同濃度尿酸處理小鼠C2C12細(xì)胞24小時(shí)后，Irisin分泌量先升高后降低，在0.

6、3mM時(shí)達(dá)高峰，隨后逐漸下降，與正常對(duì)照組（NC）相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；以不同濃度尿酸處理小鼠C2C12細(xì)胞48小時(shí)后，各處理組Irisin的含量無(wú)明顯變化；差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.尿酸組 C2C12細(xì)胞內(nèi) PGC-1αmRNA及蛋白表達(dá)：不同濃度尿酸處理 C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后，PGC-1αmRNA及蛋白的表達(dá)水平均呈先升高后降低的趨勢(shì)，在0.4mM時(shí)達(dá)高峰，隨后逐漸下降，24小

7、時(shí)處理組趨勢(shì)更明顯，與正常對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）。
　　4.葡萄糖組C2C12細(xì)胞內(nèi)Irisin、GLUT4mRNA及蛋白表達(dá)：不同濃度葡萄糖處理C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后，Irisin、GLUT4mRNA及蛋白的表達(dá)水平均呈逐漸降低的趨勢(shì)，與正常對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。
　　5.葡萄糖組C2C12分泌Irisin ELISA結(jié)果：以不同濃度葡萄糖處理C2C12細(xì)胞24

8、小時(shí)及48小時(shí)后，Irisin的分泌量逐漸降低，與正常對(duì)照組（NC）相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　6.葡萄糖組C2C12細(xì)胞內(nèi)PGC1-α mRNA及蛋白的表達(dá)：不同濃度葡萄糖處理小鼠C2C12細(xì)胞24小時(shí)及48小時(shí)后，PGC1-αmRNA及蛋白的表達(dá)水平均呈逐漸降低的趨勢(shì)，與正常對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.尿酸對(duì)C2C12細(xì)胞表達(dá)Irisin、GLUT4的影響