葡萄糖對MG63細(xì)胞護(hù)骨素及TRAIL表達(dá)的影響.pdf

1、糖尿病骨質(zhì)疏松等并發(fā)癥在許多國家已成為糖尿病相關(guān)的致死、致殘并造成醫(yī)療費用增高的主要原因之一，故探討糖尿病骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制，成為當(dāng)前研究的熱點。近年來發(fā)現(xiàn)，腫瘤壞死因子(TNF)家族的新成員——護(hù)骨素(OPG)、護(hù)骨素配體(OPGL)，以及腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ)等相關(guān)因子在調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的形成和活化方面起重要作用[1-5]，但在糖尿病骨質(zhì)疏松發(fā)病中的作

2、用，目前少見報道。為了探討糖尿病骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制，本研究觀察了不同濃度葡萄糖對MG63細(xì)胞中OPG，OPGL，TRAIL等因子mRNA表達(dá)的影響，以期從破骨細(xì)胞調(diào)節(jié)相關(guān)因子的角度為探討糖尿病骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制奠定實驗依據(jù)。 研究方法：以具有人成骨細(xì)胞表型特征的MG63細(xì)胞為研究對象，按照培養(yǎng)基中所含葡萄糖的濃度分為4組：5.5mmol/L葡萄糖組(對照組)，11.1mmol/L葡萄糖組，22.3mmol/L葡萄糖組及38.

3、9mmol/L葡萄糖組；干預(yù)24h后分別行MTT比色分析和流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期，RT-PCR法檢測MG63細(xì)胞的OPG、OPGL、TRAIL以及M-CSF、TGFβ相關(guān)因子mRNA表達(dá)，免疫組織化學(xué)法檢測MG63細(xì)胞TRAIL蛋白的表達(dá)。 研究結(jié)果：(1)與5.6mmol/L葡萄糖組相比，22.3mmol/L組可明顯抑制MG63細(xì)胞的增殖(0.2288±0.0156vs0.2700±0.0155，P＜0.05)，并在

4、38.9mmol/L時抑制效應(yīng)更加明顯(0.2037±0.0183vs0.2700±0.0155，P＜0.05)；高糖可明顯將細(xì)胞阻滯在G1期，5.6mmol/L和11.1mmol/L葡萄糖組G1期細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)分別為37.83±2.11％和39.04±2.89％，而22.3mmol/L和38.9mmol/L組G1期細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)分別為62.02±1.72％和83.95±1.08％，后兩者顯著高于5.6mmol/L和11.1mmol/L葡萄

5、糖組；(2)RT-PCR半定量結(jié)果示：高濃度葡萄糖可減少MG63細(xì)胞中OPGmRNA的表達(dá)，22.3mmol/L組和38.9mmol/L組OPGmRNA的相對表達(dá)量顯著低于對照組和11.1mmol/L葡萄糖組；與11.1mmol/L葡萄糖組相比，22.3mmol/L組(0.9193±0.0190vs0.9603±0.0127，P＜0.05)和38.9mmol/L組(0.9070±0.0144vs0.9603±0.0127，P＜0.05)

6、OPGmRNA的相對表達(dá)量分別減少了4.3％和5.6％。同時，高濃度葡萄糖可增加OPGLmRNA的表達(dá)量，與5.6mmol/L葡萄糖組(0.1092±0.0043)相比，11.1mmol/L組，22.3mmol/L組和38.9mmol/L組OPGLmRNA的相對表達(dá)量分別增加了23.6％，84.4％和114％，增加顯著(P值均小于0.05)。(3)與5.6mmol/L和11.1mmol/L葡萄糖組相比，22.3mmol/L組和38.9m

7、mol/L葡萄糖組可減少TGFβmRNA的表達(dá)量，增加M-CSFmRNA的表達(dá)。與11.1mmol/L葡萄糖組(1.0669±0.0470)相比，22.3mmol/L，38.9mmol/L葡萄糖組TGFβ的表達(dá)量分別減少了7.7％和9.4％，11.1mmol/L組與5.6mmol/L之間無差異。與5.6mmol/L葡萄糖組相比(0.9987±0.0121)，11.1mmol/L組，22.3mmol/L組和38.9mmol/L組的M-CS

8、F分別增加了7.2％，45.4％和81.0％，增加顯著(P值均小于0.05)。(4)TRAILmRNA的RT-PCR半定量結(jié)果示：與11.1mmol/L組相比，22.3mmol/L和38.9mmol/L葡萄糖組的TRAILmRNA量分別增加了19.5％(0.8839±0.0346vs0.7806±0.0233，P＜0.05)和35.7％(1.0038±0.0704vs0.7806±0.0233，P＜0.05)，而11.1mmol/L組與