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文檔簡(jiǎn)介
1、魚類對(duì)碳水化合物的利用是有限的,越來(lái)越多的研究表明,魚類的外周組織對(duì)糖的利用不足可能是其對(duì)糖不耐受的一個(gè)重要原因?,F(xiàn)階段關(guān)于這方面研究多集中于胰島素受體(InsulinRecepror,IR)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(GLUTs)和糖代謝酶方面。本課題以吉富羅非魚為研究對(duì)象,研究高濃度葡萄糖對(duì)血糖、胰島素以及相關(guān)的兩種糖酵解關(guān)鍵酶的影響。同時(shí)對(duì)吉富羅非魚的IR-1和GLUT4的基因進(jìn)行了克隆和序列分析,并研究了注射高濃度葡萄糖對(duì)這兩種基因mRN
2、A表達(dá)水平的影響,旨在探索魚類對(duì)碳水化合物不耐受的原因,為闡明高糖水平對(duì)魚類產(chǎn)生營(yíng)養(yǎng)脅迫的生理機(jī)制提供基礎(chǔ)資料。
本課題選取體重約80g的吉富羅非魚150尾,隨機(jī)分成2個(gè)試驗(yàn)組。對(duì)照組腹腔注射0.7%的無(wú)菌生理鹽水,處理組腹腔注射葡萄糖(30mg/100g體重)。在注射后的0h、1h、3h、6h和12h分別采取血液、肌肉、心臟和肝臟用于試驗(yàn)檢測(cè)。
研究注射葡萄糖對(duì)吉富羅非魚血液生化指標(biāo)、胰島素和糖酵解酶的影響
3、。結(jié)果表明:(1)吉富羅非魚在注射葡萄糖后1h血糖達(dá)到最高水平,而后顯著下降(P<0.05),3h后恢復(fù)到正常水平;(2)肝糖原在葡萄糖注射后的6h達(dá)到最高水平,而后顯著下降(P<0.05),肌糖原變化不顯著;(3)血漿和肌肉中的胰島素均在葡萄糖注射后的3h達(dá)到最高水平,而后顯著下降(P<0.05),而肝臟中的胰島素水平變化不顯著;(4)丙酮酸激酶的活力在葡萄糖注射后6h達(dá)到最高水平(P<0.05),己糖激酶的活力變化不顯著。
4、 利用RT-PCR和RACE-PCR的方法從羅非魚肌肉中克隆得到IR-1基因的片段,其GenBank注冊(cè)號(hào)為JN967750,cDNA片段大小為1979bp,有548個(gè)氨基酸組成。序列分析發(fā)現(xiàn),羅非魚的IR-1基因與其他物種比較具有很高的保守性,并具有豐富的酪氨酸激酶特征性序列。通過(guò)半定量RT-PCR檢測(cè),比較IR-1基因的mRNA表達(dá)水平在肌肉、肝臟、心臟中的差異。結(jié)果顯示,羅非魚的IR-1基因的mRNA在肌肉、心臟和肝臟中均有較
5、高的表達(dá),其中肝臟中相對(duì)較低。在高濃度葡萄糖對(duì)IR-1基因的mRNA表達(dá)的影響試驗(yàn)中,結(jié)果顯示,羅非魚在葡萄糖注射后的12h內(nèi),心臟中的IR-1基因的mRNA的表達(dá)量沒(méi)有顯著變化,而在肌肉和肝臟中在葡萄糖注射后的6h,mRNA的表達(dá)量達(dá)到最高(P<0.05),12h時(shí)恢復(fù)到正常水平。
利用RT-PCR的方法從羅非魚肌肉中克隆得到GLUT4的基因片段,其GenBank注冊(cè)號(hào)為JN900493,cDNA片段大小為603bp,有
6、200個(gè)氨基酸組成。序列分析發(fā)現(xiàn),羅非魚的GLUT4與其他物種比較具有很高的保守性,具有第一類別GLUT的保守序列,同時(shí)還具有和其他GLUTs一樣的跨膜結(jié)合位點(diǎn)。通過(guò)半定量RT-PCR檢測(cè),比較GLUT4和GLUT2基因mRNA在這肌肉、心臟和肝臟三種組織的表達(dá)量,結(jié)果顯示,GLUT4基因的mRNA在肌肉和心臟中獲得了很高的表達(dá)量,而肝臟中GLUT4的表達(dá)量相對(duì)較低;GLUT2在肝臟中的表達(dá)量最高,而肌肉和心臟中表現(xiàn)出極低的表達(dá)量。在高
7、濃度葡萄糖對(duì)GLUT4和GLUT2基因mRNA表達(dá)量的影響,試驗(yàn)結(jié)果顯示,紅肌GLUT4中的表達(dá)量在葡萄糖注射后的3h開始升高,在12h時(shí)達(dá)到最高水平(P<0.05),心臟中的GLUT4在葡萄糖注射后的第1h顯著性的升高(P<0.05),而后隨著時(shí)間的推移逐漸降低,在第6h時(shí)就恢復(fù)到了基礎(chǔ)水平。肝臟中GLUT2基因mRNA表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異。
綜上所述,注射葡萄糖顯著提高了羅非魚的血糖水平,且維持時(shí)間較長(zhǎng),而胰島素水平、
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