巴戟天糖聚物的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及抗骨質(zhì)疏松活性研究.pdf

1、本文對巴戟天（Morinda officinalis How）中的糖聚物進行提取分離，經(jīng)柱層析純化得到均一糖聚物，并對其結(jié)構(gòu)進行研究。同時對巴戟天糖聚物的體內(nèi)、體外抗骨質(zhì)疏松活性進行研究。
　　首先采用熱水/堿液將巴戟天中的水溶性糖聚物和堿溶性糖聚物進行提取，采用分級醇沉法得到四個部位糖聚物MO50、MO70、MO90、MOB，苯酚硫酸法測得四個部位的糖含量分別為：68.8％，71.3%，54.3%，32.1%。采用Sevage法

2、對其中溶解性較好MO70和MO90分別進行脫蛋白處理，然后經(jīng)DEAE-Cellulose52陰離子交換柱層析分離，再經(jīng)Sephacryl S-100凝膠柱層析進一步純化，得到MOW70-1、MOP70-2、MOW90-1三個糖聚物。采用高效凝膠滲透色譜法對其純度進行驗證，結(jié)果明MOW70-1、MOP70-2、MOW90-1為均一糖聚物，相對分子量分別是1248Da、3109Da、2172Da。綜合高效離子色譜，紅外光譜，甲基化氣質(zhì)聯(lián)用分

3、析，核磁共振分析等方法得到3個均一糖聚物的一級結(jié)構(gòu)特征，結(jié)果表明MOW70-1為果寡糖，MOP70-2、MOW90-1為果聚糖，它們的主鏈為(2→1)連接β-D-果糖，末端為葡萄糖殘基。紫外光譜掃描表明各糖聚物均不含有蛋白質(zhì)和核酸。采用掃描電鏡、圓二色譜對高級結(jié)構(gòu)進行初步研究，掃描電鏡結(jié)果顯示3個均一糖聚物微觀形態(tài)各不相同、圓二色譜結(jié)果表明它們均不含有三股螺旋結(jié)構(gòu)。其中兩個均一糖聚物MOP70-2和MOW90-1的結(jié)構(gòu)均未見報道。

4、>　　體內(nèi)抗骨質(zhì)疏松活性研究采用雙側(cè)卵巢摘除法建立原發(fā)性骨質(zhì)疏松模型，通過檢測巴戟天糖聚物對大鼠骨密度、骨量、骨生物力學性能、尿液及血清生化指標、骨微觀結(jié)構(gòu)及參數(shù)的影響來評價其抗骨疏松活性，結(jié)果表明各部位巴戟天糖聚物均能顯著增加去卵巢大鼠股骨、腰椎骨的骨密度和骨量，尤其是MO50組對于全股骨和遠端股骨骨密度的提升作用、MO50和MO90組對腰椎骨骨量的提升作用明顯強于強于陽性組E2；提高股骨、腰椎骨的生物力學性能，增強股骨和椎骨承受外力

5、的能力，其中MO50和MO90組對大鼠生物力學性能的提升效果更強；改善尿液及血清中骨轉(zhuǎn)換指標，提升骨轉(zhuǎn)換之間的平衡；修復損壞的骨微觀結(jié)構(gòu)，增加骨小梁數(shù)量、厚度，其中MO50、MO90、MOB組修復效果更為突出；改善股骨干骺端相關(guān)物理參數(shù)，逆轉(zhuǎn)骨質(zhì)疏松大鼠骨結(jié)構(gòu)退變。體外促進骨形成活性研究表明3個巴戟天糖聚物都能促進MC3T3-E1細胞增殖，其中MOP70-2效果更為顯著。選擇MOP70-2繼續(xù)測定其對成骨細胞分化、礦化及成骨相關(guān)基因量表