急性胰腺炎患者血漿DNA定量分析和基因表達(dá)譜研究.pdf

1、第一部分、急性胰腺炎患者血漿DNA定量分析及其臨床意義
　　 目的：定量檢測急性胰腺炎病人外周血血漿DNA含量并初步探討其臨床應(yīng)用價值。
　　 方法：收集40例輕癥急性胰腺炎(MAP)、20例重癥急性胰腺炎(SAP)以及50例健康體檢者的外周靜脈血，采用“微量基因組DNA提取試劑盒”提取血漿DNA，以實時熒光定量PCR方法檢測各組血漿DNA的含量，比較分析血漿DNA水平與急性胰腺炎的臨床相關(guān)性，并作受試者工作特性(ROC

2、)曲線。
　　 結(jié)果：(1)SAP組、MAP組和健康對照組血漿DNA含量的中位數(shù)分別為24.84ng/ml、7.60ng/ml和5.23ng/ml，三組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)；(2)60例急性胰腺炎患者血漿DNA含量明顯高于健康對照組(P=0.006)；SAP組明顯高于MAP組及健康對照組(P=0.006，P=0.000)，而MAP組與健康對照組之間則無明顯差異(P=0.322)；(3)以SAP組與MAP組血漿D

3、NA含量所作的受試者工作特性(ROC)曲線下面積為0.881(95％可信區(qū)間為0.773～0.989)，以血漿DNA≥11.20ng/ml作為臨界值，血漿DNA對重癥急性胰腺炎診斷的敏感性為95％，特異性為72.5％；(4)血漿DNA水平與急性胰腺炎患者APACHE-評分、Ranson評分、血清Ca2+濃度、血清CRP水平密切相關(guān)(P=0.001，P=0.013，P=0.000，P=0.001)，而與住院天數(shù)及外周血白細(xì)胞數(shù)無明顯相關(guān)性

4、(P=0.215，P=0.161)。
　　 結(jié)論：血漿DNA水平與急性胰腺炎患者病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，有可能成為急性胰腺炎患者病情監(jiān)測和重癥急性胰腺炎早期診斷的一個重要指標(biāo)。
　　 第二部分、急性胰腺炎患者外周血單個核細(xì)胞的基因表達(dá)譜研究
　　 目的：分析急性胰腺炎病人外周血單個核細(xì)胞的基因表達(dá)譜變化，初步探討重癥急性胰腺炎發(fā)病的分子機(jī)制。
　　 方法：以重癥急性胰腺炎(SAP)、輕癥急性胰腺炎(MAP)

5、以及健康體檢者作為研究對象，分別收集外周靜脈血，以Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細(xì)胞，提取總RNA，采用基因表達(dá)譜芯片Affymetrix U133A2.0及數(shù)據(jù)處理軟件分別篩選出SAP患者較MAP患者與健康體檢者的差異表達(dá)基因，將兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行交集分析，獲得共同改變的差異基因作為SAP相關(guān)的基因表達(dá)模式，應(yīng)用生物信息學(xué)方法對其進(jìn)行分析，并使用Real-Time PCR方法對部分篩查結(jié)果進(jìn)行驗證。
　　 結(jié)果：SAP與

6、健康體檢者比較，差異表達(dá)基因(2倍以上)共2574個，其中上調(diào)的基因有1193個，下調(diào)的基因有1381個；SAP與MAP比較，差異表達(dá)基因共755個，其中上調(diào)的基因有480個，下調(diào)的基因有275個。經(jīng)過交集分析，篩選出SAP相關(guān)的顯著性差異基因共413個，作為SAP相關(guān)的基因表達(dá)模式，其中包括305個上調(diào)基因和108個下調(diào)基因，這些相關(guān)基因的功能涉及生物調(diào)節(jié)、應(yīng)激信號處理、免疫應(yīng)答、細(xì)胞死亡、細(xì)胞粘附等方面。
　　 結(jié)論：應(yīng)用基