自亞微乳化柿葉提取物膠囊的制備及藥代動力學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　 (1)制備自亞微乳化柿葉提取物膠囊并對其特性和化學(xué)穩(wěn)定性進(jìn)行研究。
　　 (2)建立和確證同時測定比格犬血漿中槲皮素、山柰酚濃度的LC-MS/MS方法。
　　 (3)以自制新制劑自亞微乳化柿葉提取物膠囊為受試制劑，以市售柿葉提取物片為參比制劑，研究自亞微乳化膠囊在比格犬體內(nèi)的藥代動力學(xué)及生物利用度，為進(jìn)一步研究自亞微乳化膠囊提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:
　　 (1)按處方和工藝制備自

2、亞微乳化柿葉提取物膠囊，采用體外乳化試驗、粒徑、崩解時限和含量測定進(jìn)行質(zhì)量評價，高低溫循環(huán)和光照試驗進(jìn)行穩(wěn)定性考察。
　　 (2) LC-MS/MS方法建立與確證：以乙醚-丙酮為提取溶劑，提取前采用酸水解將柿葉黃酮結(jié)合物轉(zhuǎn)化為苷元槲皮素和山柰酚，選用異鼠李素為內(nèi)標(biāo)物，以乙腈(含0.1％甲酸)：水(含0.1％甲酸)(55:45，V/V)為流動相、Waters X Terra C18為色譜柱：通過電噴霧電離(ESI)源正離子多反應(yīng)離

3、子監(jiān)測(MRM)掃描方式進(jìn)行LC-MS/MS分析，同時測定比格犬血漿中槲皮素、山柰酚的濃度，根據(jù)藥代動力學(xué)相關(guān)指導(dǎo)原則對特異性、標(biāo)準(zhǔn)曲線、回收率、精密度與準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性等指標(biāo)進(jìn)行方法學(xué)確證。
　　 (3)自亞微乳化柿葉提取物膠囊比格犬藥代動力學(xué)試驗研究：比格犬6只，雌雄各半，隨機分組，采用自身對照，單次空腹口服藥物(柿葉提取物片500 mg及自亞微乳化柿葉提取物膠囊500mg)。應(yīng)用上述LC-MS/MS法測定比格犬血漿中不同時間

4、槲皮素和山柰酚的濃度，根據(jù)所得血漿藥物濃度.時間曲線計算各主要藥代動力學(xué)參數(shù)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)自亞微乳化柿葉提取膠囊的平均粒徑為165.9nm，平均崩解時間為5.6 min，含量在90％～110％范圍內(nèi)，高低溫循環(huán)和光照10天后含量沒有變化。
　　 (2)建立了同時測定比格犬血漿中槲皮素、山柰酚濃度的LC-MS/MS方法，方法學(xué)確證結(jié)果表明，該方法特異性好，無內(nèi)源性雜質(zhì)干擾。槲皮素和山柰酚在20～15

5、00ng/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，定量下限為20ng/ml。槲皮素批內(nèi)精密度RSD為2.8％～12.5％，批間精密度RSD為0.7％～5.2％；山柰酚批內(nèi)精密度RSD為1.7％～5.2％，批間精密度RSD為0.7％～3.3％。槲皮素的平均提取回收率為41.0％～42.0％，平均相對回收率為94.1％～98.5％；山奈酚的平均提取回收率為42.2％～44.2％，平均相對回收率為90.5％～95.6％。血漿樣品在室溫放置4h，冰凍(-70℃

6、)條件放置28 d和凍融2次下槲皮素和山柰酚的偏差均在15％內(nèi)。
　　 (3)自亞微乳化柿葉提取物膠囊藥代動力學(xué)研究結(jié)果：參比制劑與受試制劑槲皮素的Cmar分別為(194.5±82.1)ng/ml及(404.2±52.8)ng/ml；Tmax分別為(2.2±1.0)h及(5.3±1.0)h；Ka分別為(1.3±0.4)1/h及(0.3±0.1)1/h； MRT0-24分別為(6.9±1.1)h及(6.8±0.4)h；MRT0-∞

7、分別為(9.2±2.4)h及(9.8±3.8)h；AUC0-24分別為(1585.7±470.4)ng/ml·h及(3298.4±567.2)ng/ml·h；AUC0-∞分別為(1764.6±505.0)ng/ml·h及(3566.3±561.2)ng/ml·h；受試制劑相對于參比制劑的生物利用度F為(215.8％±69.8％)；參比制劑與受試制劑山柰酚的Cmax分別為(51.2±19.3) ng/ml及(77.7±21.2)ng/ml

8、；Tmax分別為(2.0±0.0 h)及(1.8±0.4)h；Ka分別為(3.2±4.4)1/h及(1.0±0.7)1/h； MRT0-24分別為(7.5±2.3)h及(7.8±1.7)h；MRT0-∞分別為(29.8±10.6)h及(16.9±3.6)h：AUC0-24分別為(529.7±284.0) ng/ml·h及(741.1±205.0)ng/ml·h；AUC0-∞分別為(1136.4±508.6)ng/ml·h及(1063.7

9、±94.1)ng/ml·h；受試制劑相對于參比制劑的生物利用度F為(115.9％±62.8％)。
　　 結(jié)論:
　　 (1)制劑粒徑小，體外崩解時間短，對熱和光穩(wěn)定，預(yù)示能提高體內(nèi)生物利用度。
　　 (2)建立和確證了同時測定比格犬血漿中槲皮素、山柰酚濃度的LC-MS/MS方法。
　　 方法學(xué)確證結(jié)果表明，該方法簡便可靠，具有特異性強、精密度與準(zhǔn)確度高、靈敏度好等特點。
　　 (3)與柿葉提取物片