AhR活化上調(diào)腸上皮源IL-10對DSS誘導的小鼠結(jié)腸炎的保護作用及機制研究.pdf

1、炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease，IBD)，是一類主要影響人類胃腸道的慢性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病。雖然其具體的病理機制尚未完全明確，但現(xiàn)有的證據(jù)表明腸粘膜免疫調(diào)控紊亂和上皮屏障功能障礙共同引發(fā)了炎癥性腸病的發(fā)生。
　　芳香烴受體(AhR)是一種胞漿內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子，可由一系列的外界環(huán)境中的配體特異性激活。AhR的激活參與腸粘膜免疫的調(diào)控。有證據(jù)表明，在IBD病人的腸道組織中AhR的表達被抑制，

2、而給予AhR的配體6-甲?；胚岵3,2b]-咔唑(FICZ)和四氯二苯并-p-二惡英(TCDD)可以緩解小鼠結(jié)腸炎模型中的炎癥反應(yīng)。雖然現(xiàn)有的一些研究已經(jīng)證實了AhR在炎癥性腸病中的保護作用，但是其作用的具體機制尚未明確。
　　目的：
　　白介素10(IL-10)是一種重要的抗炎因子，可以緩解腸粘膜炎癥。本研究通過外源性給予AhR的特異性激動劑FICZ，研究活化的AhR對DSS誘導的小鼠結(jié)腸炎的保護作用并探討其機制是否是

3、通過上調(diào)腸上皮源IL-10的表達來實現(xiàn)的。
　　方法：
　　1.給予小鼠4％的DSS喂養(yǎng)7天誘導小鼠結(jié)腸炎模型，兩天后腹腔注射AhR激動劑FICZ。每天記錄小鼠體重，第8天收集小鼠結(jié)腸組織并測量長度，切片并進行HE染色和組織學分析。
　　2.從結(jié)腸組織中提取腸上皮細胞，用免疫印跡技術(shù)檢測腸上皮細胞中IL-10的表達，用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測炎性因子mRNA的表達。
　　3.在體外培養(yǎng)Caco-2細胞株，用FI

4、CZ處理細胞，或同時給予脂多糖(LPS)處理，用免疫印跡技術(shù)檢測IL-10和STAT3/P-STAT3的表達，用用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測炎性因子mRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1.給予FICZ明顯緩解了DSS引起的小鼠體重下降;DSS處理后小鼠結(jié)腸的長度幾乎縮短一半并伴有水腫和淤血，而給予FICZ后這些情況明顯改善;組織學分析顯示DSS處理后小鼠結(jié)腸上皮和隱窩有嚴重的缺損，而FICZ處理后明顯改善了這些損傷。
　

5、　2.與DSS處理組相比，給予FICZ明顯上調(diào)了腸上皮源IL-10的表達;DSS處理后，促炎的炎性因子的mRNA表達明顯增高，而給予FICZ處理后炎性因子明顯下調(diào)。
　　3.體外培養(yǎng)Caco2細胞，給予LPS處理24小時或LPS和FICZ共同處理24小時，LPS明顯上調(diào)了IL-1β和IL-6的mRNA的表達，而FICZ明顯下調(diào)其表達;同時無論是否有LPS的刺激，F(xiàn)ICZ均明顯促進了IL-10在蛋白水平和mRNA水平的表達。