鋸緣青蟹Sox基因HMG-box的克隆及其表達(dá)分析.pdf

1、該文包括鋸緣青蟹Sox基因HMG-box的克隆和表達(dá)兩個(gè)部分.在第一部分中,參照人SRY基因HMG-box保守區(qū)的序列設(shè)計(jì)一對(duì)兼并引物,采用PCR技術(shù)以雌、雄鋸緣青蟹基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果雌、雄個(gè)體均擴(kuò)增出一條約216bp的目的片段,與陽(yáng)性對(duì)照人SRY基因HMG-box保守區(qū)擴(kuò)增片段大小一致,初步說(shuō)明雌、雄鋸緣青蟹個(gè)體中均存在SRY基因的同源基因Sox.然后將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到pGEM-T載體上,輔以PCR-SSCP分

2、析技術(shù)篩選陽(yáng)性克隆.最后挑取10個(gè)陽(yáng)性克隆(4個(gè)來(lái)自雌蟹,6個(gè)來(lái)自雄蟹)測(cè)序,經(jīng)Blast搜索表明,雌性鋸緣青蟹的4個(gè)陽(yáng)性克隆得到兩種不同序列:序列Ⅰ和序列Ⅱ,二者的比例為1:3,序列Ⅰ和序列Ⅱ片段長(zhǎng)度均為213bp,編碼71個(gè)氨基酸.雄性鋸緣青蟹的6個(gè)陽(yáng)性克隆只得到一種序列,與雌性鋸緣青蟹序列Ⅱ一致,為同一個(gè)Sox基因.Clustal W分析顯示,序列Ⅰ與序列Ⅱ之間核苷酸同源性為69%,氨基酸同源性為70%.依Sox基因家族7大亞族的

3、劃分,序列Ⅰ為Sox-B亞族成員之一,序列Ⅱ是Sox-C亞族成員之一.鋸緣青蟹雌、雄個(gè)體間Sox基因成員的差異,暗示Sox基因在鋸緣青蟹中可能有性別差異.在該論文的第二部分中,通過(guò)以鋸緣青蟹18S rRNA為內(nèi)標(biāo)的半定量RT-PCR,研究性成熟雌、雄鋸緣青蟹的性腺、肌肉、心臟和中腸腺四種組織Sox基因的表達(dá).結(jié)果顯示,Sox基因在雌性的卵巢、肌肉組織、心臟和雄性的中腸腺中表達(dá)量較低,而在雄性的精巢中表達(dá)量較高,在雌性的中腸腺、雄性的肌肉