養(yǎng)殖鋸緣青蟹支原體病原的分離與鑒定.pdf

1、2004年入秋以來(lái)，浙江省三門縣發(fā)生了嚴(yán)重的青蟹疾病，死亡率高，造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)不完全估計(jì)，2004年三門縣由此造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)1.5億元左右。至今尚無(wú)有效的控制方法。本文主要針對(duì)三門縣近年來(lái)發(fā)生的鋸緣青蟹流行疾病開展研究，分離并確定病原，為病害的預(yù)防和控制技術(shù)研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　本文以浙江省臺(tái)州市三門縣患病養(yǎng)殖鋸緣青蟹為研究對(duì)象，通過改良Frey培養(yǎng)基對(duì)青蟹支原體病原進(jìn)行分離，利用理化試驗(yàn)和分子生物學(xué)研究對(duì)

2、分離株進(jìn)行鑒定，通過分離菌回接健康青蟹確定其致病力，同時(shí)利用電鏡觀察菌株超微結(jié)構(gòu)，得出如下結(jié)果：
　　1.本文成功從瀕死患病的鋸緣青蟹腮、腸組織中分離得到一株支原體，命名為My-ld。在固體培養(yǎng)基上其菌落形態(tài)呈典型的“煎蛋狀”。理化試驗(yàn)初步確定菌株為支原體科。通過已報(bào)道支原體16SrRNA基因序列設(shè)計(jì)PCR引物并進(jìn)行擴(kuò)增、克隆?；驕y(cè)序分析后證明分離株屬于萊氏無(wú)膽甾原體（Acholeplasma laidlawii），模式株為PG

3、-8A（登錄號(hào)：CP000896.1），同緣性達(dá)到99％以上。
　　2.菌株My-ld負(fù)染后，在電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)支原體具高度多形態(tài)特征，以鏈珠狀、分枝狀、球狀、雙球狀等為主，菌體整體形態(tài)呈兩頭大，中間小。菌株內(nèi)部切片超微結(jié)構(gòu)觀察到支原體無(wú)細(xì)胞壁，外部為一層原生質(zhì)膜，胞質(zhì)染色后類似細(xì)顆粒物，內(nèi)部可見染色較深的核糖體。
　　3.病原回歸感染實(shí)驗(yàn)證明該支原體能夠使健康鋸緣青蟹引起疾病和死亡。人工感染患病青蟹癥狀與自然青蟹發(fā)病現(xiàn)象相似