鋸緣青蟹血淋巴和血藍蛋白免疫活性研究.pdf

1、鋸緣青蟹是我國沿海名貴重要的經(jīng)濟蟹類品種。隨著蟹類人工養(yǎng)殖的迅速發(fā)展，病害給養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大損失。因此，對鋸緣青蟹病害的綜合防治的研究和探索，特別是其有關(guān)免疫學特性的研究，尋找與抗菌、抗病有關(guān)的防御因子將有助于了解蟹類的免疫機理，對于控制蟹類疾病具有重要價值。 本課題采用1-DE蛋白質(zhì)組學技術(shù)對鋸緣青蟹感染副溶血弧菌后，血淋巴、肝胰腺、肌肉等多種組織中蛋白表達的差異進行比較，鑒定到血藍蛋白、cryptocyanin等免疫相關(guān)蛋白

2、。并在此基礎上，對血淋巴和血藍蛋白在血細胞凝集、細菌凝集以及抑制細菌中的作用進行比較系統(tǒng)的研究，探討了血藍蛋白的免疫活性問題。 實驗結(jié)果顯示，鋸緣青蟹感染副溶血弧菌后，血淋巴中出現(xiàn)1條明顯差異蛋白條帶(命名為SP)，鑒定為cryptocyanin。此外，我們還鑒定出iontransport-likepeptide、actin和bacteriaresponsiveprotein2等三種分別存在于鋸緣青蟹肌肉和肝胰腺中可能參與防御作

3、用的蛋白。 通過對鋸緣青蟹血淋巴和肝胰腺蛋白樣品的1-DE及1-Dimmunoblot分析后發(fā)現(xiàn)，相對分子質(zhì)量為75kDa的蛋白條帶均能與兔抗血藍蛋白特異性結(jié)合，說明此蛋白確實是鋸緣青蟹的血藍蛋白。其后，在對鋸緣青蟹感染副溶血弧菌后0-36hr的血淋巴中血藍蛋白濃度的分析中發(fā)現(xiàn)，血藍蛋白濃度出現(xiàn)先逐漸減少后上升，然后再恢復至正常水平的變化。由此說明，血藍蛋白確實是鋸緣青蟹體內(nèi)的一個重要的免疫效應因子。 在此基礎上，為了進

4、一步探討血藍蛋白的免疫活性問題，我們分別進行了凝集實驗和體外抑菌實驗。凝集實驗結(jié)果表明鋸緣青蟹血淋巴和血藍蛋白對細菌和脊椎動物紅細胞均具有一定凝集作用，表現(xiàn)出明顯的凝集活性。實驗還發(fā)現(xiàn)大腸桿菌K12的FadL、YbjP、OmpG、Tsx、OmpF和NlpB等六種外膜蛋白能與血藍蛋白特異性結(jié)合。 體外抑菌實驗表明，血藍蛋白對大腸桿菌K12和副溶血弧菌均有直接的抑制作用，但親和層析分離、純化的不同組分抑制效果存在差異，并且同一組分對