Sry核酸免疫對(duì)小鼠性別決定的影響.pdf

1、哺乳動(dòng)物的性別發(fā)育過(guò)程分為兩步：第一步“性別決定”，由基因決定原始性腺發(fā)育成睪丸或者卵巢；第二步“性別分化”，在睪丸或卵巢產(chǎn)生的不同激素作用下最終形成雄性或雌性表現(xiàn)型。性別決定是性別分化和繼續(xù)發(fā)育的前提，受睪丸決定因子SRY/Sry的啟動(dòng)，小鼠的性別決定發(fā)生在交配后的10.5d～12.5d，Sry恰好只在此時(shí)表達(dá)。但是性別決定是一個(gè)短時(shí)而復(fù)雜的過(guò)程，還需要其它基因(WT1、SF-1、SOX3、SOX9、MIS和DAX-1等)的參與，SR

2、Y/Sry在其中處于核心地位，因?yàn)樗鼘?duì)性別決定起到開(kāi)關(guān)作用。 現(xiàn)已有很多實(shí)驗(yàn)室都通過(guò)不同的轉(zhuǎn)基因技術(shù)得到了SryXX雄性轉(zhuǎn)基因小鼠，本實(shí)驗(yàn)室也曾采用精子介導(dǎo)技術(shù)實(shí)現(xiàn)了外源Sry基因向胚胎的導(dǎo)入，并得到子代性別比例向雄性的顯著偏移。同時(shí)也有研究通過(guò)基因敲除或在SryHMG盒中制造點(diǎn)突變實(shí)現(xiàn)XY雌性的性反轉(zhuǎn)，證實(shí)了Sry基因在性別決定中的關(guān)鍵作用。然而，以上技術(shù)距離生產(chǎn)實(shí)踐的應(yīng)用還有相當(dāng)長(zhǎng)的距離，截至目前尚未見(jiàn)到使用核酸免疫學(xué)方法控

3、制哺乳動(dòng)物性別發(fā)育的研究，本課題則創(chuàng)新性地利用核酸免疫技術(shù)遏制了胚胎時(shí)期Sry的作用途徑，成功地獲得了XY雌性性反轉(zhuǎn)個(gè)體。 首先構(gòu)建并檢測(cè)重組的真核表達(dá)載體pCR3.1-Sry，大量提取該質(zhì)粒制備核酸疫苗并控制其濃度和純度，通過(guò)肌肉注射免疫性成熟的母鼠，使母體產(chǎn)生抗SRY蛋白的抗體并穿過(guò)胎盤(pán)屏障影響其胚胎，抗SRY蛋白的抗體有效的結(jié)合了胚胎期表達(dá)的SRY從而阻遏其對(duì)下游基因應(yīng)有的作用，最終切斷中性性腺脊向雄性的發(fā)育通路，實(shí)現(xiàn)了X

4、Y雌性的性別反轉(zhuǎn)。免疫后的母鼠共有15只生仔，子代小鼠的性別比例(♂：♀)為1：1.11(P＜0.05)，發(fā)生了性比向雌性的偏移；使用PCR技術(shù)特異性的擴(kuò)增Sry序列檢測(cè)到了基因型為XY而表型為雌性的性反轉(zhuǎn)仔鼠，其中有些個(gè)體具有正常的性周期并且可以成功受孕。采用相同的技術(shù)手段和路線大量提取pCR3.1空質(zhì)粒以肌肉注射的形式免疫母鼠，其子代小鼠的性別比例(1：1)完全正常，而且PCR檢測(cè)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)性反轉(zhuǎn)的雌性個(gè)體。 本課題首次利用核