高糖環(huán)境對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響.pdf

1、目的：
　　利用小鼠脾細(xì)胞探求高糖環(huán)境下宿主細(xì)胞免疫功能的變化情況。
　　方法：
　　1、無菌條件下分離小鼠（C57BL/6）脾細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106/ml，培養(yǎng)于含5％胎牛血清（FBS）、2mmol/L谷氨酰胺、100u/ml青霉素、0.1mg/ml鏈霉素及25mmol/LHEPES的RPMI1640培養(yǎng)基中，同時加入LPS（1μg/ml）及ConA（5μg/ml）為刺激T、B淋巴細(xì)胞增殖，然后置于37℃、5

2、%CO2培養(yǎng)箱中孵育。
　　2、實(shí)驗(yàn)分為3組：5.5mmol/L糖濃度組、11.1mmol/L糖濃度組和25mmol/L糖濃度組，分別于培養(yǎng)6h、24h和48h時，用CytoTox96?非放射性細(xì)胞毒性檢測方法檢測不同濃度高糖對小鼠脾細(xì)胞的毒性作用；用酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-linkedImmunosorbentAssay，ELISA）檢測培養(yǎng)細(xì)胞上清中腫瘤壞死因子-α（TumorNecrosisFactor–α，TNF-α

3、）、干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）及白介素-10（Interleukin-10，IL-10）的濃度；用流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾細(xì)胞內(nèi)分泌TNF-α的情況。
　　3、數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，用SPSS16.0統(tǒng)計分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(ANOVA)，用最小顯著差法(1eastsignificantdifference，LSD)作

4、兩兩比較，若不滿足方差齊性則用Dunnett’s檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、CytoTox96?非放射性細(xì)胞毒性檢測結(jié)果：與正常糖濃度（5.5mmol/L）組相比，高糖對小鼠脾細(xì)胞沒有明顯的毒性作用。
　　2、ELISA法檢測培養(yǎng)6h、24h、48h上清中細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-6及IL-10的濃度，結(jié)果顯示：隨著糖濃度的升高，四種細(xì)胞因子的濃度逐漸降低，并呈現(xiàn)明顯的劑量-

5、效應(yīng)關(guān)系，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、流式細(xì)胞術(shù)檢測24h高糖刺激下小鼠脾細(xì)胞胞內(nèi)分泌TNF-α的情況：結(jié)果表明CD3+T細(xì)胞是小鼠脾細(xì)胞分泌TNF-α的主要細(xì)胞來源。在25mmol/L糖濃度刺激下，CD3+T細(xì)胞亞群內(nèi)TNF-α陽性細(xì)胞的百分比顯著均低于5.5mmol/L糖濃度組和11.1mmol/L糖濃度組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　高糖環(huán)境下，脾細(xì)胞在刺激物作用下分泌TNF-α、IFN