丙泊酚對(duì)小鼠小腦浦肯野細(xì)胞活動(dòng)及感覺(jué)信息傳遞的影響.pdf

1、丙泊酚對(duì)小腦皮層浦肯野細(xì)胞自發(fā)性活動(dòng)的影響
　　目的：
　　丙泊酚，2,6-雙(1-甲基乙基)苯酚乳劑，是一種快速靜脈鎮(zhèn)靜催眠藥，廣泛用于麻醉的誘導(dǎo)與維持，也用于特護(hù)病房（ICU）患者的鎮(zhèn)靜。丙泊酚對(duì)整個(gè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)均有抑制作用，其最常見(jiàn)副作用是劑量依存地抑制心肺功能。已證實(shí)丙泊酚具有活化γ氨基丁酸（GABA）A受體、抑制N-甲基-D-天門(mén)冬氨酸（NMDA）受體，并通過(guò)慢速鈣離子通道調(diào)節(jié)鈣內(nèi)流。在離體條件下，丙泊酚可通過(guò)活化

2、GABAA和甘氨酸受體對(duì)脊髓、海馬和下丘腦神經(jīng)元的活動(dòng)產(chǎn)生抑制作用，然而，丙泊酚對(duì)活體動(dòng)物小腦皮層神經(jīng)元活動(dòng)的影響尚不清楚。因此，我們應(yīng)用細(xì)胞貼附式記錄和藥理學(xué)手段研究丙泊酚對(duì)烏拉坦麻醉小鼠浦肯野細(xì)胞自發(fā)性活動(dòng)的影響，旨在闡明靜脈麻醉藥丙泊酚對(duì)小腦皮層浦肯野細(xì)胞自發(fā)性單純性放電和復(fù)雜性放電的影響機(jī)制。
　　方法：
　　成年ICR小鼠（6-8周齡）通過(guò)腹腔注射烏拉坦麻醉（1.3g/kg體重）后，行氣管插管以保證呼吸道暢通，然后

3、將動(dòng)物固定在自制的腦立體定位儀上。在小腦部位制作一個(gè)灌流槽后，在小腦CrusⅡ區(qū)相對(duì)應(yīng)處行開(kāi)顱手術(shù)，鉆一個(gè)直徑約為1-1.5mm小孔，暴露記錄部位的小腦表面，輕輕去除硬腦膜，并用蠕動(dòng)泵在腦表面持續(xù)灌流含氧的人工腦脊液(artificialcerebrospinal fluid，ACSF)。浦肯野細(xì)胞貼附式記錄使用Axopatch-200B放大器(Molecular Devices，F(xiàn)oster City，CA).通過(guò)D/A轉(zhuǎn)換器1440

4、和Clampfit10.3軟件獲取浦肯野細(xì)胞自發(fā)性活動(dòng)數(shù)據(jù)。記錄電極內(nèi)填充ACSF，填充后阻抗為3-5 M?。在細(xì)胞貼附式記錄條件下，浦肯野細(xì)胞是通過(guò)其獨(dú)特的單純和復(fù)雜放電模式來(lái)判斷的。取100秒時(shí)間內(nèi)的PC自發(fā)性放電來(lái)計(jì)算放電間隔。電生理學(xué)數(shù)據(jù)分析采用Clampfit10.3軟件，所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，并應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行配對(duì)T檢驗(yàn)或單因素方差分析，P＜0.05被認(rèn)為實(shí)驗(yàn)組之間有顯著性差異。
　　結(jié)果：

5、　?。?）腦表面給予丙泊酚(10-1000μM)劑量-依存性地抑制PCs自發(fā)性單純性放電（SS）頻率，半數(shù)有效濃度為144.5μM。
　?。?）大劑量完全抑制PCs自發(fā)性SS，但對(duì)自發(fā)性復(fù)雜峰電位放電（CS）放電頻率和波形特征無(wú)顯著影響。
　?。?）單獨(dú)給予GABAA受體阻斷劑，SR95531(40μM)，GABAB受體阻斷劑，saclofen(20μM)和甘氨酸受體阻斷劑strychnine(10μM)均沒(méi)有阻斷丙泊酚導(dǎo)致

6、的浦肯野細(xì)胞自發(fā)性SS抑制。
　?。?）給予GABAA受體阻斷劑，SR95531(40μM)和甘氨酸受體阻斷劑strychnine(10μM)的混合物，完全阻斷丙泊酚導(dǎo)致的浦肯野細(xì)胞自發(fā)性SS抑制。[結(jié)論]
　?。?）在在體條件下，腦表面給予丙泊酚通過(guò)活化GABAA和甘氨酸受體抑制成年小鼠小腦浦肯野細(xì)胞自發(fā)性SS放電頻率。
　　（2）成年小鼠浦肯野細(xì)胞存在功能性甘氨酸受體，而且在小腦皮層丙泊酚麻醉過(guò)程中起一定的作用。<

7、br>　　丙泊酚對(duì)小腦皮層浦肯野細(xì)胞感覺(jué)信息傳遞的影響
　　目的：
　　丙泊酚是具有遺忘特性的靜脈鎮(zhèn)靜麻醉劑，可以迅速而穩(wěn)定的導(dǎo)致意識(shí)喪失。丙泊酚麻醉的分子機(jī)制與活化GABAA受體、甘氨酸受體，以及抑制NMDA受體和調(diào)節(jié)鈣內(nèi)流有關(guān)。在在體條件下，丙泊酚劑量依存地抑制大腦新皮層感覺(jué)信息傳遞，然而，丙泊酚對(duì)小腦皮層浦肯野細(xì)胞感覺(jué)信息傳遞的影響還不清楚。因此，本研究擬應(yīng)用電生理與藥理學(xué)手段研究局部給予丙泊酚對(duì)烏拉坦麻醉小鼠小腦皮層

8、浦肯野細(xì)胞感覺(jué)刺激誘發(fā)反應(yīng)的影響，闡明丙泊酚對(duì)活體動(dòng)物小腦皮層PC感覺(jué)信息傳遞的影響機(jī)制。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用成年ICR小鼠（6-8周齡），通過(guò)腹腔注射烏拉坦麻醉（1.3g/kg體重）后，行氣管插管以保證呼吸道暢通，然后將動(dòng)物固定在自制的腦立體定位儀上。在小腦部位制作一個(gè)灌流槽后，在小腦CrusⅡ區(qū)相對(duì)應(yīng)處行開(kāi)顱手術(shù)，鉆一個(gè)直徑約為1-1.5mm小孔，暴露記錄部位的小腦表面，輕輕去除硬腦膜，并用蠕動(dòng)泵在腦表面持續(xù)灌

9、流含氧的ACSF。PC貼附式記錄使用Axopatch-200B放大器.通過(guò)D/A轉(zhuǎn)換器1440和Clampex10.3軟件獲取浦肯野細(xì)胞自發(fā)性活動(dòng)數(shù)據(jù)。記錄電極內(nèi)填充ACSF，填充后阻抗為3-5 M?。在細(xì)胞貼附式記錄條件下，浦肯野細(xì)胞是通過(guò)其獨(dú)特的單純和復(fù)雜放電模式來(lái)判斷的。取100秒時(shí)間內(nèi)的PC自發(fā)性放電來(lái)計(jì)算放電間隔。面部刺激選用一定壓力的瞬間吹風(fēng)刺激刺激相同側(cè)胡須墊（60 ms，50-60 psi），刺激裝置由電腦和膜片鉗記錄軟

10、件控制MASTER-8，并且與電生理信號(hào)記錄同步進(jìn)行；電生理學(xué)數(shù)據(jù)分析采用Clampfit10.3軟件，所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，并應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行配對(duì)T檢驗(yàn)或單因素方差分析，P＜0.05被認(rèn)為實(shí)驗(yàn)組之間有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　?。?）吹風(fēng)刺激小鼠觸須墊可誘發(fā)小腦PC產(chǎn)生一個(gè)負(fù)極性成分（N1）跟隨著一個(gè)正極性成分（P1），并伴有自發(fā)性SS放電暫停。
　?。?）腦表面給予丙泊酚(10-1000μM)

11、可劑量-依存地抑制P1振幅，半數(shù)有效濃度為360μM。
　　（3）腦表面給予丙泊酚劑量-依存地抑制 PC自發(fā)性活動(dòng)和感覺(jué)刺激誘發(fā)P1反應(yīng)振幅，顯著增加感覺(jué)刺激誘發(fā)N1反應(yīng)振幅。
　?。?）阻斷GABAA受體活性，感覺(jué)刺激不能誘發(fā)反應(yīng)P1，反而誘發(fā)PC產(chǎn)生SS放電。
　　（5）在GABAA受體阻斷劑，SR95531(40μM)存在條件下，丙泊酚（300μM）完全抑制PC的自發(fā)性SS放電，但明顯增加感覺(jué)刺激誘發(fā)的SS放電頻