乙醇對(duì)小鼠小腦浦肯野細(xì)胞活動(dòng)及感覺(jué)信息突觸傳遞的影響機(jī)制.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分進(jìn)行論述：
　　第一部分 乙醇對(duì)小腦皮層浦肯野細(xì)胞自發(fā)性復(fù)雜鋒電位活動(dòng)的影響
　　目的：
　　在離體條件下，小腦浦肯野細(xì)胞對(duì)乙醇敏感，可表現(xiàn)為簡(jiǎn)單鋒電位(SS)放電頻率的改變。然而，乙醇對(duì)活體動(dòng)物小腦浦肯野細(xì)胞自發(fā)性復(fù)雜鋒電位(CS)的影響機(jī)制還不清楚。因此，本研究擬應(yīng)用在體膜片鉗記錄結(jié)合藥理學(xué)手段研究乙醇對(duì)烏拉坦麻醉小鼠小腦浦肯野細(xì)胞自發(fā)性CS的影響機(jī)制。
　　方法：
　　成年ICR

2、小鼠（6-8周齡）通過(guò)腹腔注射烏拉坦麻醉后，行氣管插管后將動(dòng)物固定在自制的腦立體定位儀上，在小腦VermisⅥ-Ⅶ區(qū)相對(duì)應(yīng)處行開(kāi)顱手術(shù)，鉆一個(gè)直徑約為1-1.5mm小孔，暴露記錄部位的小腦表面，用蠕動(dòng)泵在腦表面持續(xù)灌流含氧的人工腦脊液(ACSF)。浦肯野細(xì)胞貼附式和在體全細(xì)胞膜片鉗記錄使用Axopatch-200B放大器.浦肯野細(xì)胞自發(fā)性活動(dòng)的全細(xì)胞記錄數(shù)據(jù)通過(guò)D/A轉(zhuǎn)換器1440、Clampex10.3軟件和計(jì)算機(jī)獲取。記錄電極內(nèi)填充

3、電極內(nèi)液，填充后阻抗為4-6MΩ。在軟腦膜下方150-200微米處實(shí)施浦肯野細(xì)胞全細(xì)胞記錄，浦肯野細(xì)胞的認(rèn)定是通過(guò)其規(guī)律的SS放電伴隨有不規(guī)律CS放電特征來(lái)判斷的，并通過(guò)生物素染色來(lái)確定。電生理學(xué)數(shù)據(jù)分析采用Clampfit10.3軟件，所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，并應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05被認(rèn)為實(shí)驗(yàn)組之間有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　(1)電流鉗記錄模式下，腦表面灌流乙醇(300 mM)

4、對(duì)浦肯野細(xì)胞自發(fā)性CS頻率沒(méi)有顯著影響，明顯降低自發(fā)性CS引起的SS放電暫停時(shí)間并降低CS的AHP振幅。
　　(2)電壓鉗記錄模式下，乙醇(300 mM)的使用顯著抑制浦肯野細(xì)胞自發(fā)性CS波型，表現(xiàn)為波形下面積(AUC)的減少和放電小穗數(shù)量的減少，但不改變CS自發(fā)性活動(dòng)頻率及其小穗即時(shí)頻率。
　　(3)乙醇導(dǎo)致的浦肯野細(xì)胞自發(fā)性CS波形AUC的減少具有劑量依存性，半數(shù)抑制劑量為168.5 mM。
　　(4)阻斷NMDA

5、和mGluR1受體降低自發(fā)性CS小穗數(shù)量和AUC，但不能阻斷乙醇對(duì)CS的抑制作用。
　　(5) CB1受體阻斷劑，AM251可以阻止乙醇對(duì)CS誘發(fā)SS放電暫停、AHP振幅、小穗數(shù)量和AUC的抑制作用。此外，應(yīng)用CB1受體激動(dòng)劑，WIN55212-2可顯著抑制CS的小穗數(shù)量、AUC、CS誘發(fā)SS放電暫停和AHP振幅。
　　結(jié)論：
　　(1)本研究表明乙醇通過(guò)活化CB1受體導(dǎo)致小鼠小腦浦肯野細(xì)胞自發(fā)性CS活動(dòng)抑制，提示過(guò)量

6、飲酒可能通過(guò)活化CB1受體抑制外周感覺(jué)信息向小腦皮層浦肯野細(xì)胞的傳遞。
　　(2)乙醇對(duì)自發(fā)性CS活動(dòng)的影響可能在一定程度上反映急性酒精中毒對(duì)小腦皮層感覺(jué)信息傳遞的損傷。
　　第二部分 乙醇對(duì)面部感覺(jué)刺激誘發(fā)小鼠小腦皮層浦肯野細(xì)胞外向電流的影響機(jī)制
　　目的：
　　急性過(guò)量攝入乙醇可引起小腦運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)功能障礙甚至共濟(jì)失調(diào)。我們最近研究發(fā)現(xiàn)乙醇降低感覺(jué)刺激誘發(fā)小鼠小腦皮層分子層GABA能抑制性反應(yīng)，提示乙醇調(diào)節(jié)面部感

7、覺(jué)刺激在小鼠小腦浦肯野細(xì)胞上誘發(fā)的反應(yīng)。因此，本研究擬應(yīng)用在體膜片鉗記錄結(jié)合藥理學(xué)手段研究乙醇對(duì)烏拉坦麻醉小鼠小腦浦肯野細(xì)胞感覺(jué)刺激誘發(fā)外向電流的影響機(jī)制。
　　方法：
　　成年ICR小鼠（6-8周齡）通過(guò)腹腔注射烏拉坦麻醉后，行氣管插管后將動(dòng)物固定在自制的腦立體定位儀上，在小腦VermisⅥ-Ⅶ區(qū)相對(duì)應(yīng)處行開(kāi)顱手術(shù)，鉆一個(gè)直徑約為1-1.5mm小孔，暴露記錄部位的小腦表面，用蠕動(dòng)泵在腦表面持續(xù)灌流含氧的人工腦脊液(ACSF

8、)。浦肯野細(xì)胞貼附式和在體全細(xì)胞膜片鉗記錄使用Axopatch-200B放大器.浦肯野細(xì)胞自發(fā)性活動(dòng)的全細(xì)胞記錄數(shù)據(jù)通過(guò)D/A轉(zhuǎn)換器1440、Clampex10.3軟件和計(jì)算機(jī)獲取。記錄電極內(nèi)填充電極內(nèi)液，填充后阻抗為4-6MΩ。在軟腦膜下方150-200微米處實(shí)施浦肯野細(xì)胞全細(xì)胞記錄，浦肯野細(xì)胞的認(rèn)定是通過(guò)其規(guī)律的SS放電伴隨有不規(guī)律CS放電特征來(lái)判斷的，并通過(guò)生物素染色來(lái)確定。應(yīng)用壓力噴射系統(tǒng)向同側(cè)觸須墊吹風(fēng)(30 ms，60 ps

9、i)進(jìn)行面部感覺(jué)刺激，吹風(fēng)刺激由電腦控制并通過(guò)Master8和Clamfit10.3軟件與電信號(hào)記錄同步。電生理學(xué)數(shù)據(jù)分析采用Clampfit10.3軟件，所有數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，并應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，P＜0.05被認(rèn)為實(shí)驗(yàn)組之間有顯著性差異。
　　結(jié)果：
　　(1)在電流鉗記錄模式下，吹風(fēng)刺激小鼠觸須墊可誘發(fā)小腦PC產(chǎn)生抑制性突觸后電位(IPSP)，并伴有自發(fā)性SS放電暫停。腦表面灌流乙醇(3

10、00 mM)明顯抑制IPSP和自發(fā)性放電暫停時(shí)間。
　　(2)電壓鉗記錄模式下，乙醇(300 mM)抑制感覺(jué)刺激誘發(fā)浦肯野細(xì)胞外向電流，導(dǎo)致外向電流振幅降低，半寬值減小，上升時(shí)間和延遲時(shí)間縮短。
　　(3)乙醇對(duì)感覺(jué)刺激誘發(fā)小腦皮層浦肯野細(xì)胞外向電流的抑制作用具有劑量依存性，半數(shù)抑制劑量為148.5 mM。
　　(4)應(yīng)用CB1受體阻斷劑，AM251和0-2050可以阻斷乙醇對(duì)感覺(jué)刺激誘發(fā)小腦皮層浦肯野細(xì)胞外向電流的抑