胃癌來(lái)源Exosomes活化的巨噬細(xì)胞在胃癌發(fā)展中的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：探究胃癌來(lái)源的外泌體exosomes通過(guò)對(duì)巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)促進(jìn)胃癌發(fā)展的作用及機(jī)制，為揭示exosomes通過(guò)作用巨噬細(xì)胞改變胃癌微環(huán)境促進(jìn)胃癌的發(fā)展提供理論基礎(chǔ)與實(shí)驗(yàn)支撐。
　　方法：運(yùn)用超速離心法從正常胃上皮細(xì)胞（GES-1）以及胃癌細(xì)胞（MGC-803，SGC-7901）培養(yǎng)上清中提取exosomes,并通過(guò)透射電鏡、Nanosight技術(shù)及Western-blot分析分別對(duì)exosomes的形態(tài)、數(shù)目與表面標(biāo)記進(jìn)行鑒定

2、；運(yùn)用流式細(xì)胞成像技術(shù)及高內(nèi)涵熒光顯微鏡觀察exosomes被巨噬細(xì)胞內(nèi)化的現(xiàn)象；通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞凋亡檢測(cè)探究exosomes作用的巨噬細(xì)胞上清對(duì)胃癌細(xì)胞的影響；Western blot檢測(cè)exosomes作用后的單核巨噬細(xì)胞中NF-κB通路的活化情況；使用小分子抑制劑Bay11-7082阻斷巨噬細(xì)胞中NF-κB通路的活化；qRT-PCR與ELISA檢測(cè)exosomes作用后的單核巨噬細(xì)胞

3、炎癥因子的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：從胃癌上皮細(xì)胞株及胃癌細(xì)胞株培養(yǎng)上清中成功分離出的exosomes呈現(xiàn)50-100納米左右的囊泡狀，粒子濃度約為1.0×1011/ml到2.5×1011/ml, exosomes表面蛋白標(biāo)記CD9、CD81為陽(yáng)性。流式成像檢測(cè)與高內(nèi)涵熒光顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞能夠成功地吞噬熒光標(biāo)記的胃癌細(xì)胞來(lái)源 exosomes。胃癌細(xì)胞經(jīng) MGC-803以及SGC-7901來(lái)源的exosomes處理的巨噬細(xì)胞上

4、清作用后，其遷移能力與細(xì)胞克隆形成能力較對(duì)照組明顯增強(qiáng)；胃癌細(xì)胞來(lái)源的exosomes處理巨噬細(xì)胞后其上清具有促進(jìn)MGC-803以及SGC-7901細(xì)胞侵襲的功能；而經(jīng)胃癌細(xì)胞來(lái)源的exosomes處理的巨噬細(xì)胞上清對(duì)胃癌細(xì)胞的凋亡能力改變無(wú)明顯作用。胃癌細(xì)胞MGC-803以及SGC-7901細(xì)胞來(lái)源的exosomes作用巨噬細(xì)胞后NF-κB通路活化，P-P65表達(dá)上調(diào)，定量以及ELISA檢測(cè)IL-6、TNF-α、CCL2基因以及蛋白水

5、平的表達(dá)與對(duì)照組相比明顯上調(diào)。使用NF-κB通路抑制劑Bay11-7082預(yù)處理THP-1細(xì)胞后，胃癌exosomes對(duì)單核細(xì)胞NF-κB通路活化能力受到抑制，炎癥因子IL-6、TNF-α、CCL2的表達(dá)亦明顯下調(diào)，其上清對(duì)胃癌的生物學(xué)功能無(wú)明顯改變。應(yīng)用人外周血巨噬細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)表明，MGC-803來(lái)源的exosomes能夠活化NF-κB通路，上調(diào)炎癥因子的表達(dá)，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移能力，細(xì)胞克隆能力與細(xì)胞的侵襲能力。
　　結(jié)論：胃癌