普拉克索誘導的低體溫對蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的抑制作用及其機制研究.pdf

1、第一部分普拉克索誘導大鼠低體溫的研究
　　目的：研究普拉克索是否具有降溫作用以及不同劑量的普拉克索誘導大鼠低體溫的效果。
　　方法：將42只成年健康雄性SD大鼠隨機分為7組，每組6只，分別接受0 mg/kg，0.125 mg/kg，0.25 mg/kg，0.5 mg/kg，1.0 mg/kg，1.5 mg/kg和2.0 mg/kg體重的普拉克索腹腔注射，持續(xù)監(jiān)測大鼠體溫變化，選擇合適的藥物濃度。
　　結(jié)果：1.持續(xù)動物

2、體溫檢測顯示，與0.125 mg/kg體重相比，0.25 mg/kg體重的普拉克索可以更穩(wěn)定地維持大鼠體溫在34~36℃，給藥間隔時間為8 h。2.與0.25 mg/kg體重組死亡率（0％）相比，0.5 mg，1.0 mg，1.5 mg，2.0 mg/kg體重組均出現(xiàn)不同程度死亡。
　　結(jié)論：1.多巴胺受體激動劑普拉克索可以誘導大鼠產(chǎn)生低體溫；
　　2.0.25 mg/kg體重的普拉克索可以安全有效地誘導大鼠體溫在34~36

3、℃之間；
　　第二部分普拉克索誘導的低體溫對大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的抑制作用
　　目的：研究普拉克索誘導的低體溫對蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）后早期腦損傷（EBI）的影響。
　　方法：將30只成年雄性SD大鼠隨機分為正常組、假手術(shù)組、SAH組以及SAH+普拉克索，SAH+普拉克索+復溫組等5組，每組6只。所有SAH大鼠經(jīng)自體股動脈抽取非肝素化動脈血注入視交叉前池，致SAH模型，在SAH后48h處死大鼠。假手

4、　　術(shù)組大鼠進行股動脈采血并予顱骨鉆孔，但未進行注血，于處理后48h處死大鼠。此外，普拉克索處理：在SAH建模后立即接受0.25 mg/kg體重的普拉克索腹腔注射。復溫處理：進行普拉克索腹腔注射后通過加熱毯維持大鼠體溫在37℃。各組大鼠均接受持續(xù)體溫監(jiān)測。建模后48h，大鼠安樂死，取材。首先通過TUNEL染色方法檢測腦細胞的凋亡情況；通過western blot檢測腦組織中的白蛋白含量（即白蛋白泄露）分析血腦屏障的完整性；通過行為學評分

5、評估行為能力；分析在SAH條件下，普拉克索是否可以誘導體低溫，以及普拉克索對SAH引起的早期腦損傷的影響。其次，對SAH組，SAH+普拉克索以及SAH+普拉克索+復溫組進行血腦屏障完整性和行為能力評估，分析普拉克索是否通過誘導低體溫發(fā)揮作用。綜上分析，在SAH條件下，普拉克索對SAH引起的早期腦損傷的影響，普拉克索是否通過誘導體低溫發(fā)揮作用。
　　結(jié)果：1.持續(xù)動物體溫檢測顯示，在SAH條件下，腹腔注射0.25 mg/kg體重的普

6、拉克索可以穩(wěn)定地維持大鼠體溫在34~36℃，給藥間隔時間為8 h。2. TUNEL染色結(jié)果顯示，正常組和假手術(shù)組中僅出現(xiàn)少量的TUNEL陽性細胞；與假手術(shù)組相比，SAH組TUNEL陽性細胞數(shù)量極其顯著的增多，而普拉克索誘導的低體溫可以有效地降低SAH引起的TUNEL陽性細胞數(shù)量增多。3.Western blot檢測腦組織中白蛋白的含量，結(jié)果顯示正常組和假手術(shù)組腦組織中白蛋白含量極低，且之間沒有顯著差異；與假手術(shù)組相比，SAH組腦組織中白

7、蛋白含量極其顯著的升高，而普拉克索誘導的低體溫可以有效地降低SAH引起的腦組織中白蛋白含量的升高。4，行為學評分結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，SAH組行為學能力顯著降低，而普拉克索誘導的低體溫可以有效緩解SAH引起的行為學能力降低。5，對SAH組，SAH+普拉克索以及SAH+普拉克索+復溫組進行血腦屏障完整性和行為能力評估，結(jié)果顯示：SAH條件下，普拉克索對血腦屏障的保護和行為學的改善均被復溫處理顯著抑制。
　　結(jié)論：1. SAH條件

8、下，大鼠腦細胞凋亡和血腦屏障破壞，行為學能力下降。
　　2.普拉克索誘導的低體溫可以有效地抑制 SAH引起的腦細胞凋亡和血腦屏障破壞，有效改善行為學能力，發(fā)揮腦保護作用。
　　3.復溫抑制普拉克索的腦保護作用，進一步說明普拉克索通過誘導低體溫發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
　　4.SAH條件下，普拉克索通過誘導低體溫抑制SAH引起的EBI。
　　第三部分普拉克索誘導的低體溫在蛛網(wǎng)膜下腔出血后發(fā)揮腦保護的作用機制
　　目

9、的：研究普拉克索誘導的藥物性低溫是否通過 PI3K/AKT/GSK3β這一信號通路發(fā)揮保護作用。
　　方法：將30只成年雄性SD大鼠隨機分為SAH組（n=6）和SAH+普拉克索組（n=24）; SAH+普拉克索組的24只大鼠又隨機分為溶劑對照組，PI3K抑制劑LY294002組，AKT抑制劑MK-2206組以及GSK3β抑制劑CHIR99021組等4組，每組6只。各抑制劑與普拉克索同時進行腹腔注射。首先，通過western blo

10、t檢測普拉克索處理對bcl-2的蛋白水平，caspase3活化以及PI3K/AKT/GSK3β通路的影響；其次，通過 western blot檢測各抑制劑在該動物模型中是否發(fā)揮作用；最后，通過western blot檢測各組腦組織中白蛋白含量和活化的caspase3水平，以及通過TUNEL和FJB染色，行為學評分檢測在PI3K/AKT/GSK3β這一通路被阻斷的情況下，普拉克索誘導的低體溫是否還能發(fā)揮腦保護作用。
　　結(jié)果：1，在

11、SAH條件下，普拉克索處理有效地上調(diào)了bcl-2的蛋白水平，抑制了caspase3的活化，激活了PI3K/AKT/GSK3β通路。2，在SAH條件下，LY294002可以有效地抑制PI3K，AKT和GSK3β的磷酸化；MK-2206可以有效地抑制AKT和GSK3β的磷酸化；CHIR99021可以有效地抑制GSK3β的磷酸化。3，在各阻斷劑存在的情況下，普拉克索誘導的低體溫不能有效地抑制SAH誘導的caspase3的活化，血腦屏障破壞，腦

12、細胞凋亡和神經(jīng)元壞死，行為能力喪失。
　　結(jié)論：1.在SAH條件下，普拉克索有可能是通過激活了PI3K/AKT/GSK3β通路發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
　　2.在SAH條件下，加入PI3K抑制劑LY294002可抑制下游蛋白AKT和GSK3β磷酸化，不能發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
　　3.在SAH條件下，PI3K抑制劑LY294002，AKT抑制劑MK-2206以及GSK3β抑制劑CHIR99021均可抑制普拉克索誘導的藥物性低溫的