自體骨髓干細胞移植聯(lián)合脾臟切除門奇斷流術(shù)影響肝儲備功能的臨床研究.pdf

1、背景：
　　肝硬化是臨床上常見的慢性進行性肝臟疾病，表現(xiàn)為慢性肝炎等多種因素引起肝小葉破壞而纖維組織增生取代了正常的肝組織。肝硬化晚期常出現(xiàn)上消化道出血和肝性腦病等嚴重并發(fā)癥導致患者死亡。其中，由門靜脈高壓引起的上消化道大出血是臨床患者最主要的死亡原因。目前在臨床上，緩解門靜脈高壓主要采用脾切除門奇靜脈斷流術(shù)，減少了上消化道大出血的發(fā)生，然而，該術(shù)式對于肝儲備功能的改善幫助不大。肝硬化引起的肝儲備功能逐漸降低被認為是不可逆轉(zhuǎn)的，目

2、前最好的治療方案是進行肝移植。然而，供肝的日益短缺、昂貴的移植費用和較高的技術(shù)要求限制了肝移植的普遍開展。骨髓干細胞(Bone marow stem cells，BM-SCs)具有分化為多種功能細胞的潛能，當其進入肝臟后在微環(huán)境的誘導下可向肝細胞分化，以取代受損的肝細胞。經(jīng)過大量動物模型及臨床研究，已經(jīng)證實其能分化為正常肝細胞并發(fā)揮功能，增加功能性肝臟體積，對改善肝臟儲備功能，治療肝硬化具有積極的影響。目前，自體骨髓干細胞移植治療肝硬化

3、已經(jīng)在國內(nèi)外得到廣泛應用。
　　目的：
　　將30名符合脾切除門奇靜脈斷流術(shù)指征的肝硬化失代償期患者，隨機分為兩組，每組15人，對治療組患者應用自體骨髓干細胞聯(lián)合脾切除門奇斷流術(shù)治療。對照組患者僅行脾切除門奇斷流術(shù)治療。觀察并比較兩組患者治療后前白蛋白(Prealbuminn，PA)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic-pyruvic transaminase，ALT)，總膽紅素(Total bilirubin，TBIL)，白蛋白

4、(Serum albumin，ALB)凝血酶原時間(Prothrombintime，PT)的變化，腹水量和肝臟體積變化情況以及Child-Pugh分級的改善情況，通過以上指標綜合評估兩組患者肝臟儲備功能，探討自體骨髓干細胞聯(lián)合脾切除門奇斷流術(shù)治療相比僅行脾切除門奇斷流術(shù)在治療失代償期肝硬化上對改善肝臟儲備功能是否存在優(yōu)勢。
　　資料與方法：
　　經(jīng)本院倫理委員會批準，患者知情同意。30例確診為乙肝后肝硬化失代償期患者為我院肝

5、膽外科2011年1-8月收治患者，其乏力、消瘦、面色晦暗、胃腸功能紊亂和吸收不良綜合癥等肝儲備功能降低癥狀明顯。肝功能、血常規(guī)等檢查呈現(xiàn)出典型的肝功能減退和脾功能亢進表現(xiàn)，胃鏡可見食管胃底靜脈中度或重度曲張。B超，CT等影像學檢查提示肝臟體積縮小，呈結(jié)節(jié)樣改變，門靜脈增寬，脾大，腹水。以上患者均符合《病毒性肝炎防治方案》中的診斷標準，具有脾切除門奇靜脈斷流術(shù)指征。治療組男11例，女4例，年齡(56±13)歲。根據(jù)Child-Pugh分級

6、，其中A級11例，B級4例。對照組男10例，女5例，年齡(59±11)歲。其中A級10例，B級5例。
　　治療組患者全麻后在髂后上棘采集骨髓血量40-80mL，用4000U肝素抗凝。將骨髓離心后去除其脂肪層，然后加入等量的DMEM培養(yǎng)液，待骨髓稀釋后將其制成細胞懸液。在細胞懸液中加入Percoll分離液后，以1200r/min轉(zhuǎn)速于室溫環(huán)境下離心30min，然后吸取其界面細胞層，用生理鹽水清洗后再離心三次(1500r/min)，每

7、次5min。最后用10mL生理鹽水重懸細胞，分離得單個核細胞數(shù)約為12.5×1010個，全程注意無菌操作以避免污染。在對單個核細胞進行活細胞和CD34+陽性細胞計數(shù)后，將細胞放入37℃，5％CO2孵箱中培養(yǎng)待用。
　　34例患者術(shù)中均可見肝臟體積縮小，表面散在大小不等硬化結(jié)節(jié)等肝硬化典型表現(xiàn)，可見脾增大，脾門血管明顯增粗，食管胃底靜脈明顯曲張等門脈高壓表現(xiàn)。對照組僅行脾切除門奇斷流術(shù)。治療組患者行脾切除門奇斷流術(shù)后經(jīng)門靜脈屬支注入

8、自體骨髓干細胞懸液。
　　檢測并比較術(shù)后1周、2周、4周兩組患者的ALT、TBIL、ALB、PT、PA、腹水量變化情況。比較術(shù)后1月兩組患者肝臟大小差異以及Child-Pugh分級情況。
　　結(jié)果：
　　1.術(shù)后第2周起，自體骨髓干細胞移植聯(lián)合脾切除門奇斷流術(shù)的患者的PT，ALT，TBIL顯著低于對照組。PA，ALB顯著高于對照組。兩組腹水量均明顯減少。術(shù)后1月CT測量患者肝臟體積大小可見治療組患者肝臟增生，肝臟體積顯