復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型TLRs-MyD88信號(hào)通路及炎癥因子的影響.pdf

1、目的：
　　通過觀察復(fù)方蜥蜴散(Compound Lizard Powders,CLP)不同微粒組合劑干預(yù)潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠的一般情況、結(jié)腸組織病理情況，及對(duì)TLRs/MyD88信號(hào)通路下游信號(hào)因子髓樣分化因子88(MyD88)、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)蛋白的表達(dá)和血清腫瘤壞死因子-ɑ(TNF-ɑ)、白介素-10(IL-10)含量的影響，探討CLP治療潰瘍性結(jié)腸炎(UC)的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用CLP治療UC提供實(shí)

2、驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　84只SD雄性大鼠，4～6周齡，體重200±20g，自購(gòu)進(jìn)在屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)7d后，隨機(jī)分為6組，每組14只，即空白對(duì)照組、模型組、柳氮磺吡啶(SASP)組、CLP80組、CLP100組、CLP80+100組，依次編號(hào)為A～F組。所有大鼠禁食不禁水24h后，除A組大鼠采用等量生理鹽水灌腸處理外，其余組大鼠均采用三硝基苯磺酸(TNBS)與乙醇混合溶液灌腸制備UC模型。灌腸后第3d各組隨機(jī)抽取一

3、只大鼠殺檢進(jìn)行HE染色。顯微鏡下觀察確定符合潰瘍性結(jié)腸炎病理診斷標(biāo)準(zhǔn)后，各治療組分別給予對(duì)應(yīng)藥物灌胃治療，A組及B組給予生理鹽水灌胃治療，連續(xù)14d，1次/d。給藥14d后禁食24h，在麻醉情況下解剖大鼠，腹主動(dòng)脈采血并留取結(jié)腸組織肉眼觀察，將病變處包埋。HE染色后顯微鏡下觀察大鼠結(jié)腸黏膜病理形態(tài)并參照結(jié)腸組織學(xué)損傷分級(jí)進(jìn)行評(píng)分；鄰近切片采用免疫組化法檢測(cè)MyD88、TRAF6蛋白的原位表達(dá)；ELISA法檢測(cè)TNF-α、IL-10的含量

4、。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況：造模過程中大鼠無死亡情況，治療過程中治療組除A組無死亡、F組死亡1只外，其他治療組各死亡2只?？瞻讓?duì)照組大鼠兩眼有神，反應(yīng)迅速，進(jìn)食水量良好，體型肥胖，體表溫暖，被毛色白、厚密、柔順、有光澤，糞便呈顆粒狀，便次正常，無肛周污染情況。模型組大鼠多數(shù)精神萎靡，目光呆滯似睡，反應(yīng)遲鈍，進(jìn)食水量差，形體消瘦，體表發(fā)涼，被毛稀松潮濕，毛色泛黃無光，喜蜷縮懶動(dòng)，腹部稍膨隆，便

5、溏伴粘液膿血，便次多，肛周污染范圍較大。SASP組、CLP80組、CLP100組大鼠被毛厚密程度及毛色、腹部膨隆、便次及便量多、粘液膿血便癥狀較模型組均有好轉(zhuǎn)。SASP組、CLP80組、CLP100組大鼠一般情況的不同之處：SASP組大鼠便次及便量多、粘液膿血便癥狀迅速改善，但精神仍萎靡、喜扎堆，飲食水量少、體重增加緩慢；而CLP80組及CLP100組大鼠用藥初期腹部膨隆、便次及便量多、粘液膿血便癥狀較SASP組緩慢改善，但在整個(gè)治療過

6、程中大鼠精神、活動(dòng)、飲食水量、體重情況較SASP組改善較為明顯，且治療末期CLP80、CLP100組大鼠便次、便量、便質(zhì)趨于正常。CLP80+100目組大鼠精神狀態(tài)良好，目光有神，反應(yīng)較快，活動(dòng)量增多，進(jìn)食進(jìn)水量增加，體表溫暖，被毛緊密無潮濕感，毛色白稍欠光澤，排便正常。
　　2.病理組織學(xué)觀察：肉眼見：空白對(duì)照組大鼠結(jié)腸形態(tài)正常，無迂曲短縮，伸展性好，腸絨毛排列整齊而密集，腸壁無水腫、糜爛、出血點(diǎn)；模型組大鼠結(jié)腸迂曲短縮、黏膜隆

7、起有出血點(diǎn)、呈糜爛狀；SASP組、CLP80組、CLP100組大鼠結(jié)腸均有不同程度的迂曲皺縮、伸展性差、脆性改變，腸腔狹窄，黏膜隆起等表現(xiàn)，CLP80+100組大鼠結(jié)腸潰瘍面愈合良好，結(jié)腸形態(tài)改善最佳。顯微鏡下見：空白對(duì)照組大鼠結(jié)腸黏膜層次清晰，腺體排列正常；模型組大鼠結(jié)腸組織層次模糊，腺體結(jié)構(gòu)紊亂，隱窩膿腫，見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)于黏膜層及黏膜下層，呈慢性重度炎癥；各治療組與模型組相比，炎癥程度減輕。SASP組大鼠結(jié)腸黏膜層及黏膜下層見少

8、量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，呈輕度炎癥；CLP80組大鼠結(jié)腸黏膜層廣泛見散在炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜下層見少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，呈輕度炎癥表現(xiàn)；CLP100組黏膜層見少量炎性細(xì)胞，黏膜下層見散在炎性細(xì)胞并見肉芽組織增生，呈介于輕度與中度之間的炎癥表現(xiàn)；CLP80+100組僅在黏膜層見散在炎性細(xì)胞，腺體排列較整齊，趨于正常。
　　3.結(jié)腸組織學(xué)損傷評(píng)分結(jié)果：各組與A組比較，結(jié)腸組織學(xué)損傷評(píng)分明顯升高，均有顯著差異(P＜0.05)；各治療組與B組比較，大鼠

9、結(jié)腸組織學(xué)損傷評(píng)分明顯降低，均有顯著差異(P＜0.05)；CLP80組、CLP100組、SASP組比較，均無顯著差異(P>0.05)；CLP80+100組分別與CLP80組、CLP100組、SASP組比較，結(jié)腸組織學(xué)損傷評(píng)分降低，有顯著差異(P＜0.05)，提示以CLP80+100對(duì)結(jié)腸炎癥性損傷修復(fù)效果最好。
　　4.ELISA結(jié)果：各組與A組比較，血清TNF-α含量升高、IL-10含量降低，均有顯著差異(P＜0.05)；各治療

10、組與B組比較，血清TNF-α含量降低、IL-10含量升高，均有顯著差異(P＜0.05)；CLP80組、CLP100組、SASP組比較，均無顯著差異(P>0.05)；CLP80+100組分別與CLP80組、CLP100組、SASP組，血清TNF-α含量降低、IL-10含量升高，有顯著差異(P＜0.05)，提示以CLP80+100降低促炎因子TNF-α和升高抗炎因子IL-10的作用最好。
　　5.免疫組化結(jié)果：各組與A組比較，結(jié)腸My

11、D88、TRAF6蛋白的表達(dá)水平明顯升高，均有顯著差異(P＜0.05)；各治療組與B組比較，結(jié)腸MyD88、TRAF6蛋白的表達(dá)水平明顯降低，均有顯著差異(P＜0.05)；CLP80組、CLP100組、SASP組比較，均無顯著差異（P>0.05）；CLP80+100組分別與CLP80組、CLP100組、SASP組比較，結(jié)腸MyD88、TRAF6蛋白的表達(dá)水平明顯降低，有顯著差異(P＜0.05)，提示以CLP80+100組MyD88、TR

12、AF6蛋白表達(dá)量最少。
　　結(jié)論：
　　1.復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑能夠顯著改善潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠一般情況及結(jié)腸組織病理表現(xiàn)。
　　2.復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑顯著降低結(jié)腸組織損傷評(píng)分及降低TNF-ɑ、升高IL-10的分泌水平，起到調(diào)節(jié)免疫的作用，防止炎性因子進(jìn)一步攻擊腸黏膜。
　　3.復(fù)方蜥蜴散不同微粒組合劑顯著降低TLRs/MyD88信號(hào)通路下游信號(hào)分子MyD88、TRAF6蛋白的表達(dá)，起到抑制腸道炎癥反應(yīng)