前扣帶皮層神經元NMDA受體在痛情緒形成中的作用觀察.pdf

1、目的：
　　根據國際權威組織（國際疼痛研究學會，IASP）對疼痛含義的解釋，可以把疼痛分為兩個基本部分：感覺分辨（sensory-discrimination）及情緒反應（emotional-affective dimensions）。大量研究已向我們揭示，疼痛的感覺部分及情緒反應部分是由不同的中樞機制作用產生，并且是經由相異的神經傳導通路介導。人類和動物的行為學、電生理學和腦成像等相關治療、實驗結果已提供證據，位于大腦額葉內側的

2、前扣帶皮層（anterior cingulate cortex，ACC），該核團參與疼痛誘發(fā)的厭惡情緒的形成，及在不良情緒引起的行為表現方面起著重要作用，尤其是其吻側部ACC（rostral ACC，rACC）。經手術或其他方式損毀動物大腦雙側rACC組織，能夠抑制疼痛相關不良情緒誘發(fā)的條件性位置回避（conditioned place avoidance，CPA）行為的產生。根據部分臨床治療和基礎實驗研究的結果提示，rACC神經元上N

3、MDA受體的激活參與痛相關不良情緒的形成。
　　本實驗使用的動物模型為完全弗氏佐劑（complete Freund’s adjuvant，CFA）誘導的條件性位置回避（CFA-conditioned place avoidance，C-CPA）模型，結合rACC內分別給予不同濃度NMDA受體的拮抗劑APⅤ或AMPA受體拮抗劑DNQX，測量 C-CPA行為反應和熱痛行為反應（熱縮足反射潛伏期，PWL），探究在此實驗所使用的動物模型中

4、，拮抗rACC內NMDA受體是否對由CFA誘發(fā)的慢性炎癥性疼痛刺激引起的不良情緒反應有緩解作用，并對 NMDA受體在這一作用中可能涉及到的機制分析討論。
　　方法：
　　1.建立由完全弗氏佐劑誘導的慢性持續(xù)性炎癥性疼痛動物模型。
　　本實驗使用成年SD大鼠（雄性，250~270g），在其左側后足腳掌皮下注射CFA，建立慢性炎性痛模型。注射等劑量NS為對照。
　　2.CFA誘導的條件性位置回避（C-CPA）模型的建

5、立。將實驗大鼠其隨機分為3組：
　　(1)未注射對照組；
　　(2)注射生理鹽水（NS）對照組；
　　(3)注射CFA實驗組。n=6～12/組。將由注射CFA引起的慢性炎癥性疼痛作為特定的條件，并與可分辨的環(huán)境耦合，建立條件性位置回避（C-CPA）模型，同一實驗組大鼠在“疼痛環(huán)境”中停留時間的基礎值與實驗值和不同實驗組間回避分數（CPAscore）數值的比較，檢測CFA是否能使大鼠有條件位置回避行為。
　　3.用

6、C-CPA模型檢測APⅤ或DNQX對痛情緒的影響。
　　實驗分22個組。n=6～9/組。
　　Group1（2組）：大鼠左側后足腳掌注射CFA/NS，rACC區(qū)微量注射NS；
　　Group2（10組）：大鼠左側后足腳掌注射CFA，rACC區(qū)分別注射0.5/2/8/12/16nmol/μl APⅤ或DNQX；
　　Group3（10組）：大鼠左側后足腳掌NS，rACC區(qū)分別注射0.5/2/8/12/16nmol/

7、μl APⅤ或DNQX。
　　4.檢測熱縮足反射潛伏期（Paw Withdrawal Thermal latency，PWL）。
　　在C-CPA的Day1和Day3行為訓練結束后，檢測大鼠PWL，觀察在rACC區(qū)注射不同劑量APⅤ或DNQX后大鼠的熱痛行為。
　　結果：
　　1.大鼠后足腳掌注射CFA可誘導產生C-CPA反應。
　　大鼠左側后足腳掌注射CFA組、注射NS組和未注射對照組比較，注射CFA組大

8、鼠PWL在Day3處理后與Day1基礎值相比明顯縮短，其余兩組無明顯變化。說明后足底腳掌注射CFA可引起大鼠炎癥性疼痛。
　　未注射對照組和后足腳掌注射注射NS對照組中，大鼠Day3在“疼痛環(huán)境”匹配室的停留時間與Day1相比均無統(tǒng)計學差異，兩個組的回避分數相比無統(tǒng)計學差異。后足腳掌注射CFA，大鼠在Day3“疼痛環(huán)境”匹配室停留時間明顯少于Day1。與未注射對照組及注射 NS對照組的回避分數相比有統(tǒng)計學差異，所以大鼠對“疼痛環(huán)境

9、”產生痛相關不良情緒。
　　2.rACC區(qū)內注射APⅤ拮抗神經元上NMDA受體可緩解C-CPA。
　　在大鼠左側后足腳掌和rACC內分別給予CFA和NS的處理組中，Day3 CPA實驗測量的基礎值明顯少于Day1測量的實驗值，回避分數數值較大，產生對“疼痛環(huán)境”的厭惡情緒。大鼠后足腳掌注射 CFA且在 rACC分別注射劑量不相同0.5/2/8/12/16（nmol/μl）APⅤ的處理組，當注射小劑量APⅤ（0.5nmol/μ

10、l）時，APⅤ未發(fā)揮作用，表現為大鼠Day3在“疼痛環(huán)境”匹配室停留的時間和Day1相比沒有統(tǒng)計學差異，并未形成CPA反應；隨著APⅤ注射劑量增加（2/8nmol/μl），回避分數逐漸減小，兩劑量組間沒有統(tǒng)計學差異，但與注射NS組相比有統(tǒng)計學差異，即緩解了 CPA反應；繼續(xù)增加注射劑量（12/16nmol/μl），回避分數逐漸增加，與注射NS組相比沒有統(tǒng)計學差異，即未形成CPA反應。后足腳掌注射NS及rACC內分別注射不同劑量的（0.5

11、/2/8/12/16nmo/μl）APⅤ的處理組與后足腳掌無處理，各組回避分數與后足腳掌注射NS及rACC內注射NS處理組之間均沒有統(tǒng)計學差異，即單純rACC內注射APⅤ不會使大鼠形成C-CPA或CPP反應。
　　3.rACC區(qū)內注射DNQX對C-CPA反應沒有緩解作用。
　　大鼠后足腳掌注射 CFA， rACC內注射不同濃度的 DNQX（0.5/2/8/12/16nmol/μl），各組的回避分數與大鼠后足腳掌注射CFA，r

12、ACC內注射NS的處理組相比，沒有統(tǒng)計學差異，說明在rACC區(qū)內注射DNQX沒有緩解由CFA誘發(fā)的痛厭惡情緒的作用。大鼠后足腳掌注射 NS，rACC區(qū)內注射不同濃度的DNQX（0.5/2/8/12/16nmol/μl），五個劑量組的回避分數與大鼠后足腳掌注射 NS， rACC內注射NS的處理組相比，沒有統(tǒng)計學差異，rACC內注射QNDX不會使大鼠形成CPP反應。
　　4.rACC區(qū)注射APⅤ或DNQX不改變由CFA引起的熱痛反應行

13、為表現。
　　大鼠后足腳掌注射CFA，rACC注射APⅤ或DNQX的各組大鼠PWL在處理后比處理前明顯縮短，處理后各組PWL無統(tǒng)計學差異。
　　結論：
　　1.拮抗 rACC內 NMDA受體可緩解由 CFA致痛引發(fā)的痛情緒，較小劑量（2/8nmol/μl）的APⅤ即可發(fā)揮作用；注射12或16nmol/μl APⅤ的大鼠的CPA反應并未緩解。單純rACC內注射APⅤ不會產生CPP。
　　2.拮抗rACC內AMPA受