正電子標(biāo)記納米探針 68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC的制備方法及其體內(nèi)外生物學(xué)評(píng)價(jià).pdf

1、目的：合成NOTA-DGL及NOTA-DGL-PEG-RGDyC兩種前體，分別對(duì)其進(jìn)行正電子放射性標(biāo)記及體內(nèi)外生物學(xué)評(píng)價(jià)。
　　方法：
　　1.前體的合成。
　?、貼OTA-DGL的制備：DGL與NOTA-NHS溶于在DMSO溶液中室溫下避光反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，進(jìn)行氨基乙?；磻?yīng)，最后用醋酸鈉緩沖液進(jìn)行透析。
　　②NOTA-DGL-PEG-RGDyC的制備： NHS-PEG-MAL與RGDyC在醋酸鈉緩沖液

2、中室溫下避光反應(yīng)5min，反應(yīng)結(jié)束后加入DGL，再加入硼酸緩沖液繼續(xù)反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，加入過(guò)量β-巰基乙醇。NOTA-NHS溶于DMSO溶液，繼續(xù)室溫下避光反應(yīng)24h，最后用醋酸鈉緩沖液進(jìn)行透析。
　　2.顯像劑的制備。
　　用鹽酸從鍺-鎵發(fā)生器中淋洗出68GaCl3，與前體在70℃下避光反應(yīng)10～15min。
　　3.脂水分配系數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)。
　　4.體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。
　　5.細(xì)胞攝取及洗脫實(shí)驗(yàn)。

3、r>　　6.體內(nèi)生物學(xué)分布實(shí)驗(yàn)。
　?、僬Ｐ∈蟮捏w內(nèi)生物學(xué)分布。
　?、诤闪鍪蟮捏w內(nèi)生物學(xué)分布。
　　7.荷瘤鼠的Micro-PET顯像。
　　8.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS20.0進(jìn)行分析數(shù)據(jù)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.標(biāo)記前體NOTA-DGL及NOTA-DGL-PEG-RGDyC的合成表征。
　?、偻ㄟ^(guò)核磁氫譜證明PEG

4、及RGDyC成功連接到DGL上，得到DGL-PEG-RGDyC。
　?、谕ㄟ^(guò)紫外吸光度檢測(cè)證明NOTA-NHS成功連接到DGL上得到標(biāo)記前體NOTA-DGL及NOTA-DGL-PEG-RGDyC。
　　2.放射性標(biāo)記及質(zhì)量控制。顯像劑可在15min內(nèi)可制得，放化產(chǎn)率在50％~70%之間，分離純化后其放化純度均＞98%。pH值介于4.0～4.2之間為無(wú)色、透明、澄清的溶液，無(wú)其他重金屬污染。
　　3.脂水分配系數(shù)測(cè)定。<

5、br>　　經(jīng)測(cè)定68Ga-NOTA-DGL的LogP=-1.62，68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC的LogP=-3.037，表明兩種納米分子探針均呈水溶性。
　　4.體外穩(wěn)定性。68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC分別在0.1M PBS及小牛血清中在37℃下孵育至120min后放化純均＞95%，說(shuō)明兩種納米分子探針的體外穩(wěn)定性良好，比活度達(dá)30GBq/μmol。
　　5.細(xì)

6、胞攝取及洗脫實(shí)驗(yàn)。
　?、偌?xì)胞洗脫實(shí)驗(yàn)。A549及U87MG細(xì)胞能快速、高效地結(jié)合68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC，其對(duì)兩種細(xì)胞的結(jié)合力隨時(shí)間延長(zhǎng)進(jìn)一步增強(qiáng)，在孵育至2h時(shí)達(dá)到高峰。
　?、诩?xì)胞洗脫實(shí)驗(yàn)。68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC在兩種細(xì)胞中均表現(xiàn)為隨時(shí)間的延長(zhǎng)緩慢下降，且在2h末仍有顯像劑滯留。
　　6.體內(nèi)生物學(xué)分布。

7、　?、僬Ｐ∈蟮捏w內(nèi)生物學(xué)分布。68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC在血液中清除速度較快，放射性攝取主要分布在肝臟和脾臟，其他主要臟器放射性攝取較少。
　?、诤闪鍪蟮捏w內(nèi)生物學(xué)分布。分別注射68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC1小時(shí)后， U87MG腫瘤組織的攝取值分別為（0.19±0.02）%ID/g和（0.27±0.09）%ID/g，低于其他主要臟器組織

8、。
　　7.荷瘤鼠的Micro-PET顯像。
　　經(jīng)尾靜脈分別注射68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC后，放射性攝取均主要分布在肝臟，瘤結(jié)節(jié)未見(jiàn)明顯攝取。
　　結(jié)論：通過(guò)對(duì)NOTA-DGL及NOTA-DGL-PEG-RGDyC的68Ga標(biāo)記證明，此種標(biāo)記方法簡(jiǎn)單、快速，且放化產(chǎn)率較高。然而68Ga-NOTA-DGL及68Ga-NOTA-DGL-PEG-RGDyC在腫瘤組織的攝取及顯