泛素羧基端水解酶L5在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、作為細(xì)胞內(nèi)主要的蛋白質(zhì)降解途徑，泛素蛋白酶系統(tǒng)(Ubiquitin Proteasome System，UPS)包括26S蛋白酶體、去泛素化酶(Deubiquitinase，DUBs)、泛素分子、泛素活化酶E1、泛素結(jié)合酶E2和泛素連接酶E3。DUBs是一組能夠水解泛素羧基端的酯鍵、肽鍵和異肽鍵并將泛素分子從蛋白質(zhì)上移除的蛋白酶家族。泛素羧基端水解酶L5（Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase iso

2、zyme L5，UCH-L5）是去泛素化酶家族成員之一。UCH-L5通過(guò)從多聚泛素鏈的遠(yuǎn)端亞基逐個(gè)去除泛素分子，對(duì)于蛋白降解的調(diào)節(jié)具有雙重性，一方面通過(guò)移除標(biāo)記蛋白的泛素分子從而抑制蛋白降解;另一方面通過(guò)適當(dāng)移除泛素分子從而使得被泛素標(biāo)記的蛋白具有有利于進(jìn)入蛋白酶體的構(gòu)象從而促進(jìn)蛋白質(zhì)的降解。當(dāng)UCH-L5結(jié)合蛋白酶體19S調(diào)節(jié)亞基的Rpn13/Admr1受體時(shí)，UCH-L5活性增強(qiáng);當(dāng)UCH-L5與INO80復(fù)合物的NFRKB亞基結(jié)合

3、時(shí)，其活性受到抑制。但是UCH-L5在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制尚不清楚。
　　本研究對(duì)19例冷凍和51例石蠟包埋的臨床病理切片進(jìn)行分析，結(jié)果表明與正常腦組織相比，UCH-L5在腦膠質(zhì)瘤組織中呈低表達(dá)。在體外實(shí)驗(yàn)中，UCH-L5可抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87MG、U251細(xì)胞的遷移和侵襲功能。我們選擇SNRPN，SNRPF和CKLF作為UCH-L5的靶向候選基因，該三種基因已被證明在膠質(zhì)瘤或其他腫瘤中異常表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)，干擾SNRP

4、F，SNRPN或CKLF的表達(dá)可抑制U87MG細(xì)胞的遷移和侵襲能力;而干擾UCH-L5的表達(dá)可上調(diào)SNRPF的mRNA和蛋白水平，并且UCH-L5調(diào)節(jié)SNRPF在遷移和侵襲的功能在U87MG細(xì)胞得到了進(jìn)一步證實(shí)，隨后在293T細(xì)胞中證實(shí)UCH-L5過(guò)表達(dá)可以下調(diào)SNRPF蛋白水平，因此本研究認(rèn)為UCH-L5通過(guò)下調(diào)SNRPF從而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的遷移和侵襲功能。同時(shí)，我們也發(fā)現(xiàn)UCH-L5可以下調(diào)包括SNRPF等8種基因在內(nèi)的Sm家族的

5、mRNA水平表達(dá)。UCH-L5的活性受NFRKB調(diào)節(jié)，我們發(fā)現(xiàn)在U87MG和U251細(xì)胞中，NFRKB-siRNA影響UCH-L5和SNRPF的mRNA水平，NFRKB-siRNA下調(diào)SNRPF的mRNA水平，因此我們推測(cè)，UCH-L5調(diào)節(jié)SNRPF的mRNA的表達(dá)可能受到NFRKB的調(diào)節(jié)。目前UCH-L5在膠質(zhì)瘤發(fā)生中的具體作用和調(diào)節(jié)機(jī)制尚未完全闡明，因此，進(jìn)一步研究UCH-L5的生物學(xué)功能能夠?yàn)橄嚓P(guān)疾病的治療提供新的思路，具有重要的