脂筏特異蛋白對囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)作用的初步研究.pdf

1、細(xì)胞物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)實質(zhì)上是細(xì)胞內(nèi)的一個龐大而復(fù)雜的物流系統(tǒng)，這一系統(tǒng)的異常將導(dǎo)致各種相應(yīng)疾病的發(fā)生。囊泡是這一物流系統(tǒng)中一種可調(diào)控的重要的運(yùn)輸工具，脂筏是膜脂雙層內(nèi)含有特殊脂質(zhì)及蛋白質(zhì)的微區(qū)，它們在這一物流系統(tǒng)中具有重要的作用。本課題引入單分子研究技術(shù)和全內(nèi)反射熒光成像技術(shù)，實時動態(tài)的研究了兩類脂筏蛋白與囊泡之間的動態(tài)空間定位關(guān)系，并分析了其中一類脂筏蛋白的動力學(xué)特征。這一研究有助于我們進(jìn)一步揭示脂筏的發(fā)生機(jī)制；而且對于今后我們進(jìn)一步認(rèn)識脂筏

2、功能具有重要的理論及實際指導(dǎo)意義。 本論文首先構(gòu)建了含熒光標(biāo)記的caveolin 和flotillin 兩類脂筏特異性蛋白的表達(dá)質(zhì)粒，初步研究了細(xì)胞膜脂筏和囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)系。本實驗中我們具體采用全內(nèi)反射熒光顯微成像技術(shù)研究了在小鼠腎上腺嗜鉻瘤細(xì)胞系（PC12 ）中caveolin 和NPY 、SNAP25的胞內(nèi)動態(tài)定位關(guān)系和相互作用以及flotillin 和NPY 、SNAP25 的胞內(nèi)動態(tài)定位關(guān)系和相互作用。結(jié)果顯示：cave

3、olin 無論是在靜息狀態(tài)還是在高鉀刺激下與NPY 大囊泡或與SNAP25 均沒有明顯的共存現(xiàn)象。同樣flotillin 與NPY 大囊泡和SNAP25 也沒有明顯的共存關(guān)系，而且flotillin 自身在TIRFM 下呈一種片狀分布，這說明flotillin 在表達(dá)后即分布在細(xì)胞膜上。從定位關(guān)系上來看，脂筏標(biāo)記蛋白沒有明顯參與大囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)的證據(jù)。這與以前人們用化學(xué)方法抽提PC12 細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)構(gòu)成SNARE 蛋白的SNAP-25 在富含膽