NPAS2、脂肪酸合成相關(guān)基因單核苷酸多態(tài)性與TACE治療肝細(xì)胞肝癌患者預(yù)后的相關(guān)性研究.pdf

1、肝細(xì)胞肝癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）是原發(fā)性肝癌最常見的病理類型，具有起病隱匿、進(jìn)展迅速等特點(diǎn)，也正是這些特點(diǎn)使得在早期診斷、治療中具有較大的困難，造成預(yù)后較差。目前HCC診斷主要包括血清學(xué)、影像學(xué)及病理活檢等方法，但在早期篩查尚缺乏特異、有效的標(biāo)志物。在治療方面早期肝癌患者以手術(shù)切除為主，中晚期患者采取以肝動脈灌注化療加栓塞(Transcatheter arterial chemoembolizati

2、on，TACE)為主的綜合性治療，但用于預(yù)后評估的血清學(xué)指標(biāo)物僅AFP一項，遠(yuǎn)不能滿足臨床需要。為此尋找可用于HCC早期診斷、及預(yù)后判斷的標(biāo)志物成為亟待解決的問題。研究表明遺傳因素在腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程中起著重要作用，基因單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism，SNP)是重要的遺傳標(biāo)志物。本研究擬尋找有效的SNP位點(diǎn)用于肝癌患者預(yù)后評估。
　　生物節(jié)律是真核生物中普遍存在的生命現(xiàn)象，它受到眾多生

3、物節(jié)律相關(guān)基因調(diào)控，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)包括神經(jīng)PAS結(jié)構(gòu)域蛋白2(Neuronal PAS domain protein2,NPAS2)在內(nèi)的10種生物節(jié)律基因，該領(lǐng)域正成為生命科學(xué)研究的新熱點(diǎn)。其中NPAS2作為生物節(jié)律基因家族的重要成員，近年來受到的關(guān)注越來越多。研究還發(fā)現(xiàn)NPAS2作為核
　　轉(zhuǎn)錄因子，在腫瘤發(fā)生、進(jìn)展、腫瘤代謝及細(xì)胞表型改變等諸多方面也有不可輕視的作用。
　　脂肪酸合成的異常升高在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有關(guān)鍵作用。大

4、量基礎(chǔ)研究表明腫瘤細(xì)胞脂肪酸合成升高可生成大量磷脂，進(jìn)而為其快速分裂增殖提供充足的細(xì)胞膜、脂類信號分子合成原料。此外腫瘤細(xì)胞還可以通過大量合成脂類物質(zhì)改變細(xì)胞膜組成成分，利于其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸及侵襲轉(zhuǎn)移等。而抑制腫瘤細(xì)胞的脂肪酸合成則可顯著抑制腫瘤細(xì)胞增殖與侵襲轉(zhuǎn)移。近年來的研究顯示，肝癌組織中脂肪酸合成通路相關(guān)酶基因表達(dá)水平上調(diào)，抑制脂肪酸合成通路關(guān)鍵酶基因可以抑制肝癌細(xì)胞增殖，這些結(jié)果進(jìn)一步說明了脂肪酸合成關(guān)鍵酶在肝癌發(fā)生、發(fā)

5、展中具有重要作用。
　　SNP是生物基因組里普遍的遺傳變異表現(xiàn)，它是在某個種群中特定遺傳區(qū)域中單一核苷酸突變所致的脫氧核糖核酸序列具有多態(tài)性。研究表明腫瘤、糖尿病等的發(fā)生發(fā)展都受到特定SNP的影響，而肝癌中關(guān)注兩者關(guān)系及具體機(jī)制的研究仍相對較少。對于中晚期的HCC患者，目前TACE治療是最重要的治療手段，但是許多基本狀況相同的患者接受同樣的TACE治療，而其預(yù)后卻顯著不同。咎其原因，可能與患者基因的多態(tài)性相關(guān)，成功的發(fā)現(xiàn)影響患者預(yù)

6、后的基因位點(diǎn)對判斷患者預(yù)后及個體化治療意義非凡。
　　目的：探討NPAS2基因及脂肪酸合成相關(guān)基因SNP與經(jīng)TACE治療HCC患者預(yù)后的關(guān)系；初步探討NPAS2對肝癌細(xì)胞脂肪酸合成的影響。
　　方法：以經(jīng)TACE治療的HCC患者外周血樣本為研究對象，選擇NPAS2基因及脂肪酸合成相關(guān)基因乙酰輔酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACACA)、ATP-檸檬酸裂解酶(ATP-citrate lyase,AC

7、LY)上潛在功能性SNP位點(diǎn)，利用Sequenom iPLEX分型系統(tǒng)進(jìn)行基因分型，隨后采用多因素的COX風(fēng)險比率統(tǒng)計模型及生存曲線分析等統(tǒng)計學(xué)方法分析上述SNP位點(diǎn)與經(jīng)TACE治療的HCC患者預(yù)后的相關(guān)性。最后以人肝癌細(xì)胞株為研究對象，調(diào)節(jié)NPAS2表達(dá)后分析肝癌細(xì)胞脂肪酸合成及增殖情況。
　　結(jié)果：
　　在第一部分的研究中發(fā)現(xiàn):1） NPAS2基因中SNP位點(diǎn)rs1053096與rs2305160不同基因型與經(jīng)TACE治

8、療肝癌患者預(yù)后顯著相關(guān)。2）NPAS2基因中rs1053096位點(diǎn)VV基因型、rs2305160位點(diǎn)WV+VV基因型為預(yù)后較差的危險基因型。3）NPAS2基因中rs1053096位點(diǎn)VV基因型、rs2305160位點(diǎn)WV+VV基因型具有累積效應(yīng)。4）NPAS2基因rs1053096與rs2305160位點(diǎn)中TA單倍體基因型、C_T-G_A及T_T-G_A雙倍體基因型為預(yù)后較差的單倍體型及多倍體型。
　　第二部分研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1）A

9、CACA基因上rs11871275位點(diǎn)及ACLY基因rs9912300位點(diǎn)與肝癌患者預(yù)后密切相關(guān)。2）ACACA基因上rs11871275突變基因型+高血清甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein,AFP）及ACLY基因rs9912300位點(diǎn)突變基因型+高血清AFP是肝癌患者預(yù)后較差的危險因素，且上述2個SNP突變基因型與患者高血清AFP具有聯(lián)合效應(yīng)。
　　第三部分研究結(jié)果提示：1）肝癌組織中NPAS2轉(zhuǎn)錄水平高于癌旁組織。2

10、） NPAS2過表達(dá)上調(diào)肝癌細(xì)胞中甘油三脂及中性脂肪的合成。3）NPAS2低表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞增殖。
　　結(jié)論：1）NPAS2基因中rs1053096與rs2305160位點(diǎn)不同基因型與經(jīng)TACE治療肝癌患者預(yù)后顯著相關(guān)，且上述2個SNP位點(diǎn)危險基因型對患者預(yù)后的影響具有累積效應(yīng)，其可能作為判斷經(jīng)TACE治療肝細(xì)胞肝癌患者預(yù)后判斷的標(biāo)志；2）本科課題在經(jīng)TACE治療的HCC患者中發(fā)現(xiàn)ACACA及ACLY基因SNP位點(diǎn)rs118712