運動相關基因單核苷酸多態(tài)性和基因表達的研究.pdf

1、本研究擬討論運動相關基因的單核苷酸多態(tài)性和基因表達以及單核苷酸多態(tài)性與臨床生化指標的關聯(lián)性。
　　 第一部分：高通量檢測單核苷酸多態(tài)性方法的建立及運動相關基因的單核苷酸多態(tài)性
　　 研究對象：856名省隊以上運動員(男495名，女361名)和284名非運動員(男161名，女123名)
　　 研究方法：利用標簽微陣列和單堿基延伸的高通量檢測方法，研究運動相關基因上的48個單核苷酸多態(tài)性位點的多態(tài)性及與生化指標的關系

2、。儀器為Beckman的SNPstream基因分型系統(tǒng).研究的基因及SNP位點為ACE(rs4362，rs4461142)，CKMM(rs1133190，rs4884)，ADRB2(rs1042718，rs1042713)，ADRA2A(rs3750625，rs553668)，GDF8(rs3791783)，CNTF(rs2515362)，HLA—A(rs3823342)，PLCG1(rs206699)，KCNA4(rs1323860)

3、，CASQ1(rs617698，rs3747621)，CFTR(rs4148724)，PPARGC1A(rs768695)，AMPD1(rs2268701)，ACTN3(rs540874，rs1791690)，IL6(rs2069837)，BDKRB2(rs2069578，rs4900313，rs4900315)，IGF-1(rs972936，rs7956547)，IGF-2(rs734351)，UCP2(rs660339)，LEPR(

4、rs12037879，rs12029311)，F(xiàn)ABP2(rs4834771，rs11935130)，LEP(rs12706832，rs11761556)，NOS3(rs3918188，rs7830)，RAD1(rs37436)，MYLK(rs820325，rs1350152)，TNF(rs3093661)，CNTFR(rs1571401，rs6476455)，COL1A1(rs2586488，rs2696247)和VDR(rs4334

5、089，rs7971418，rs4760648，2189480)。統(tǒng)計分析運動員及不同項群運動員與非運動員對照組之間基因多態(tài)性和等位基因分布是否存在統(tǒng)計學差異。將運動員按照基因型分成三組，統(tǒng)計分析不同SNP位點的多態(tài)性與生化指標是否存在相關性。
　　 研究結果：
　　 1.建立了高通量檢測運動相關基因單核苷酸多態(tài)性的方法。
　　 2.在全體運動員組和正常對照組之間：發(fā)現(xiàn)rs3750625、rs2515362、rs

6、12029311和rs1042713共4個SNP位點基因型分布特征存在統(tǒng)計學差異。rs3750625、rs6476455、rs2515362和rs1042713共4個SNP位點的等位基因分布特征存在統(tǒng)計學差異。
　　 3.不同項群運動員與正常對照組之間：①速度力量型和正常對照組之間rs972936、rs660339、rs1042718、rs11935130和rs12029311位點基因型分布特征有統(tǒng)計學差異，rs660339、r

7、s11761556、rs768695，rs11935130和rs12037879位點等位基因分布特征有統(tǒng)計學差異；②耐力型和正常對照組之間rs7830、rs3750625、rs3823342、rs4760648、rs2515362和rs1042713位點基因型分布特征有統(tǒng)計學差，rs7830、rs972936、rs3750625、rs2515362、rs11935130和rs1042713位點等位基因分布特征有統(tǒng)計學差異；③表現(xiàn)難美型和

8、正常對照組之間rs3750625、rs6476455、rs2515362和rs1042713位點基因型分布特征有統(tǒng)計學差異，rs3750625、rs6476455、rs2515362和rs1042713位點等位基因分布特征有統(tǒng)計學差異；④技能準確型和正常對照組之間rs540874、rs660339、rs4334089，rs1042718、rs4760648、rs2515362、rs11935130、rs1323860和rs1202931

9、1位點基因型分布特征有統(tǒng)計學差異，rs540874、rs1042718、rs4760648、rs2515362、rs2268701、rs11935130、rs1323860和rs12037879位點等位基因分布特征有統(tǒng)計學差異；⑤隔網對抗型和正常對照組之間rs12029311位點基因型分布特征有統(tǒng)計學差異，rs972936和rs12029311位點等位基因分布特征有統(tǒng)計學差異；⑥同場對抗型和正常對照組之間rs4461142、rs2069

10、578和rs12029311位點基因型分布特征有統(tǒng)計學差異，rs6476455、rs2069578和rs12029311位點等位基因分布特征有統(tǒng)計學差異；⑦格斗對抗型和正常對照組之間rs3750625、rs2268701和rs1042713位點基因型分布特征有統(tǒng)計學差異，rs820325、rs972936、rs3750625、rs2268701和rs1042713位點等位基因分布特征有統(tǒng)計學差異；⑧綜合型和正常對照組之間rs375062

11、5、rs540874、rs4760648和rs2268701位點基因型分布特征有統(tǒng)計學差異，rs3750625、rs540874、rs4760648和rs1323860位點等位基因分布特征有統(tǒng)計學差異。
　　 4.男運動員和女運動員之間，統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)大部分生化指標均與性別相關，所以分別統(tǒng)計不同基因型男運動員和女運動員的生化指標與基因型的相關性。男、女運動員在相同SNP位點基因型和生化指標均有相關性的情況為：在rs3750625位

12、點，三種基因型運動員的Ast、Tp、K、CO2、Ca、Fe、Cr、UN和Alp有統(tǒng)計學差異；在rs4148724位點，三種基因型運動員的CO2有統(tǒng)計學差異；在rs540874和rs4461142位點，三種基因型運動員的CK有統(tǒng)計學差異。
　　 還有許多位點的基因型和一些生化數(shù)據(jù)有相關性，但在男運動員和女運動員中情況不同。
　　 第二部分：高通量測定基因表達方法的建立及運動相關基因表達的檢測
　　 研究對象：182

13、名省隊以上運動員，其中92名男性，90名女性：21名20～30歲非運動員對照，10名男性，11名女性。
　　 研究方法：實驗采用Beckman的GeXp系統(tǒng)，多重RT-PCR和PCR反應后通過毛細管電泳分離擴增產物，得到每個樣品的基因表達量。利用case-control studies方法，檢測分析了182名運動員和21名非運動員TGFB1、PLCG1、HP、HIFIA、CNTF、ADRB2、LEPR、UCP2、TNF、RAD1

14、和IGF1及四個內參基因HD1、GAPDH、18s—rRNA和β—actin的基因表達首先經過相關分析找到相關性好的內參基因，然后將所研究基因的表達量與內參基因表達量幾何均數(shù)的比值作為統(tǒng)計量，分析運動相關基因的表達情況。
　　 研究結果：
　　 1.我們在體系中采用了HD1、GAPDH、18s—rRNA和β—actin四個管家基因，經過統(tǒng)計相關分析，發(fā)現(xiàn)HD1、GAPDH和18s—rRNA的相關性比較好，因此采用這三個基

15、因作為內參。
　　 2.對所有運動員和對照組的相對基因表達量的統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，TNF、CNTF、IGF1、TGFB1和HIF1A的表達量在兩組間有統(tǒng)計學差異，運動員組高于對照組。
　　 3.不同項群運動員與對照組基因相對表達量統(tǒng)計分析結果不同。表現(xiàn)難美型運動員和對照組基因相對表達量CNTF、IGF1、HIF1A和PLCG1有統(tǒng)計學差異。格斗對抗型運動員和對照組IGF1、HIF1A、PLCG1、RAD1和HP基因相對表達量有