桑黃菌絲體多糖的分離純化、活性研究和結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、Phellinus igniarius是在我國發(fā)現(xiàn)、并廣為分布的桑黃菌種，其多糖具有良好的抗腫瘤、抗氧化和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用。有關(guān)Phellinus igniarius子實體多糖的活性和結(jié)構(gòu)已有報道，而Phellinus igniarius菌絲體多糖的純化、活性和結(jié)構(gòu)分析報道較少。作者在采用Phellinus igniarius（菌株編號5.95）發(fā)酵得到菌絲體的基礎(chǔ)上，對其中多糖的分離純化、生物活性和一級結(jié)構(gòu)進(jìn)行系統(tǒng)的研究。主要結(jié)

2、果如下:
　　搖瓶培養(yǎng)的桑黃菌絲體干燥、粉碎后，經(jīng)熱水提取，30％、60％和80％乙醇分級沉淀，得到三種桑黃菌絲體粗多糖IPS30、IPS60和IPS80，得率分別為3.89％、2.06％和1.67％;粗多糖分別采用DEAE-52纖維素離子交換柱和Sephacryl S-400凝膠層析柱分離和純化，得到四種水溶性多糖IPSW-1、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4，其多糖含量分別為90.88％、94.08％、92.15％和8

3、9.33％。采用HPSEC-RI-MALLS檢測IPSW-1、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4的純度和分子量，結(jié)果表明四種純化多糖均為均一多糖，且分子量分別為34.1 kDa，17.7 kDa，15.1kDa和21.7 kDa。蛋白質(zhì)含量分析及UV檢測均表明這四種均一多糖都不含蛋白質(zhì)和核酸。
　　通過測定多糖對超氧陰離子、羥基自由基、DPPH·的清除以及還原能力來綜合評價IPS30、IPS60和IPS80的抗氧化活性。結(jié)果

4、表明:粗多糖IPS30、IPS60和IPS80，濃度均為0.40 mg/mL時，對超氧陰離子的清除率依次達(dá)到38.39％、52.98％、43.58％;對羥基自由基的清除率分別為91.46％、54.44％和58.89％;濃度均為0.7 mg/mL時，還原力依次為0.01、0.045和0.04;當(dāng)濃度為2.0 mg/mL時，IPS30、IPS60和IPS80對DPPH·的清除能力分別為30.82％、57.03％和60.76％。綜合四種實驗結(jié)

5、果，表明IPS30、IPS60和IPS80都具有較好的抗氧化性，且IPS30、IPS60和IPS80清除羥基自由基的能力高于清除超氧陰離子。
　　通過MTT法，測定均一多糖IPSW-1、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4的體外抗腫瘤活性。結(jié)果表明，四種均一多糖對HepG2和SW480的增殖均有良好的抑制作用，但對HGC的增殖無抑制作用。在濃度為70μg/mL時，IPSW-1、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4對HepG

6、2的抑制率分別為39.0％、35.0％、25.0％和29.0％;在濃度為100μg/mL時，對SW480的抑制率分別為55％、35％、56％和26％。
　　采用間羥基聯(lián)苯-硫酸法測定IPSW-1、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4的糖醛酸含量，分別為7.42％、5.84％、7.82％和10.98％。通過紅外光譜(IR)、氣相色譜(GC)、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化和核磁共振等對均一多糖進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。確定IPSW-1、

7、IPSW-2、IPSW-3和IPSW-4都屬于α型D-葡萄吡喃糖。IPSW-1只含葡萄糖，其主鏈為Glc(1→6)和Glc(1→3，4)，非還原性末端為Glc; IPSW-2只含葡萄糖，其主鏈為Glc(1→6)、Glc(1→3，4)和Glc(1→3，6)，端基為Glc; IPSW-3只含葡萄糖，其主鏈為Glc(1→6)、Glc(1→3，4)和Glc(1→3，6)，非還原性末端為Glc;IPSW-4含有鼠李糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖