小鹽芥C-,2-H-,2-類鋅指蛋白基因ThZF1的克隆及其功能研究.pdf

1、本研究采用EST策略并結(jié)合RACE(RapidAmplificationofcDNAEnds)技術(shù)，成功地從鹽生模式植物小鹽芥的幼苗葉片中克隆了一個(gè)G2H2類型的鋅指蛋白基因ThZF1。并對其表達(dá)特征，轉(zhuǎn)錄因子特性及轉(zhuǎn)基因植物中的功能進(jìn)行了初步研究。　　研究結(jié)果表明，小鹽芥ThZF1cDNA編碼蛋白由276個(gè)氨基酸組成，推測其分子量為30kD，等電點(diǎn)8.27。它與擬南芥AZF2有最高的同源性，同源性達(dá)79％。推測的小鹽芥ThZF1蛋白

2、沒有跨膜區(qū)，為水溶性蛋白。它包含兩個(gè)C2H2鋅指結(jié)構(gòu)域，每個(gè)C2H2鋅指結(jié)構(gòu)域都具有植物特有的序列QALGGH，是典型的TFⅢA型鋅指蛋白。N端的B-Box可能是其核定位(NLS)序列，另外還發(fā)現(xiàn)了L-Box，DNL-Box等結(jié)構(gòu)序列。　　利用Northern雜交和RT-PCR技術(shù)分析表達(dá)差異，結(jié)果表明ThZF1受干旱和鹽的誘導(dǎo)。GFP融合瞬時(shí)表達(dá)實(shí)驗(yàn)顯示它定位于細(xì)胞核?！　hZF1有激活酵母HIS基因的作用，凝膠阻滯分析表明Th

3、ZF1能特異結(jié)合EP2元件序列。所有這些結(jié)果說明，ThZF1可能是一個(gè)EP2結(jié)合型轉(zhuǎn)錄因子，暗示它是一個(gè)潛在的植物轉(zhuǎn)錄因子。煙草瞬時(shí)表達(dá)實(shí)驗(yàn)表明，ThZF1能誘導(dǎo)AtEPSP1：GUS的表達(dá)，說明它可能直接作用于EPSPs類下游基因的啟動(dòng)子而調(diào)控后者的表達(dá)?！　榱诉M(jìn)一步研究ThZF1的功能，用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將其基因轉(zhuǎn)入擬南芥，得到轉(zhuǎn)基因的擬南芥azf2突變體互補(bǔ)植株，并研究了轉(zhuǎn)基因互補(bǔ)植株與突變體和野生對照的生長以及對鹽和干旱的耐受性