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文檔簡介
1、[鍵入文字][鍵入文字][鍵入文字]3實(shí)驗(yàn)部分實(shí)驗(yàn)部分3.1樣品的采集采集學(xué)校周圍餐館附近的土壤;按三角形分布形狀采取三處土樣(一,二,三),將采集的樣品置于采樣袋中帶回實(shí)驗(yàn)室備用。3.2儀器與試劑3.2.1主要儀器ZHWY1102型恒溫培養(yǎng)振蕩器(上海智城分析儀器制造有限公司);水浴恒溫振蕩器(上海亞榮生化儀器廠);SWCJ1Cμ型雙人單面潔化工作臺(蘇州凈化);AR2140型分析天平(梅特勒托利多儀器(上海)有限公司);離心機(jī)(無錫
2、瑞江);XFLS50MA高壓滅菌鍋(浙江新豐醫(yī)療器械);3030型臺式培養(yǎng)箱(北京永光明醫(yī)療儀器);JY983D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)。3.2.2主要試劑及配制橄欖油(oliveoilCR)為上海畢高化學(xué)試劑公司產(chǎn)品;聚乙烯醇(PVA、CR)、溴甲酚紫(pH5.2(黃)~6.8(紫))為國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品;95%乙醇(AR)、蔗糖(AR)、氯化鉀(AR)、硫酸鎂(AR)、硫酸銨(AR)為天津科密歐化學(xué)
3、試劑有限公司;蛋白胨(BR)為北京奧博星生物技術(shù)公司產(chǎn)品;甘氨酸(AR)為中國惠興生化試劑有限公司產(chǎn)品。(1)2%聚乙烯醇(PVA)溶液:稱取20g聚乙烯醇(PVA)加入去離子水800mL,在沸水浴中加熱不斷攪拌,直至全部溶解,冷卻后用0.2molLNaOH調(diào)pH值為8.2,再定容至1000mL。(2)聚乙烯醇(PVA)橄欖油乳化液:取2%聚乙烯醇溶液150mL,加50mL橄欖油,用高速組織搗碎機(jī)攪拌6min,即成乳白色聚乙烯醇橄欖油乳
4、化液,保存于低溫下備用。(3)溴甲酚紫溶液(100mg100mL):準(zhǔn)確稱取0.01g溴甲酚紫加8mL蒸餾水?dāng)嚢枞芙?,轉(zhuǎn)入10mL容量瓶中,定容至10mL,備用。mLpH8.0的甘氨酸NaOH緩沖液,5mL聚乙烯醇橄欖油乳化液,將其放置40℃水浴預(yù)熱5min,然后精確加入1mL酶液,保溫10min,立即加入15mL乙醇終止反應(yīng),加入酚酞指示劑2滴,用0.05molLNaOH滴定至紅色為終點(diǎn)。計(jì)算公式如下:ntVVmLU?????1000
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