堿性脂肪酶

1、[鍵入文字][鍵入文字][鍵入文字]3實(shí)驗(yàn)部分實(shí)驗(yàn)部分3.1樣品的采集采集學(xué)校周圍餐館附近的土壤；按三角形分布形狀采取三處土樣（一，二，三），將采集的樣品置于采樣袋中帶回實(shí)驗(yàn)室備用。3.2儀器與試劑3.2.1主要儀器ZHWY1102型恒溫培養(yǎng)振蕩器（上海智城分析儀器制造有限公司）；水浴恒溫振蕩器（上海亞榮生化儀器廠）；SWCJ1Cμ型雙人單面潔化工作臺（蘇州凈化）；AR2140型分析天平（梅特勒托利多儀器（上海）有限公司）；離心機(jī)（無錫

2、瑞江）；XFLS50MA高壓滅菌鍋（浙江新豐醫(yī)療器械）；3030型臺式培養(yǎng)箱（北京永光明醫(yī)療儀器）；JY983D超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）。3.2.2主要試劑及配制橄欖油（oliveoilCR）為上海畢高化學(xué)試劑公司產(chǎn)品；聚乙烯醇（PVA、CR）、溴甲酚紫（pH5.2(黃)～6.8（紫））為國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；95%乙醇（AR）、蔗糖（AR）、氯化鉀（AR）、硫酸鎂（AR）、硫酸銨（AR）為天津科密歐化學(xué)

3、試劑有限公司；蛋白胨（BR）為北京奧博星生物技術(shù)公司產(chǎn)品；甘氨酸（AR）為中國惠興生化試劑有限公司產(chǎn)品。（1）2%聚乙烯醇（PVA）溶液：稱取20g聚乙烯醇（PVA）加入去離子水800mL，在沸水浴中加熱不斷攪拌，直至全部溶解，冷卻后用0.2molLNaOH調(diào)pH值為8.2，再定容至1000mL。（2）聚乙烯醇（PVA）橄欖油乳化液：取2%聚乙烯醇溶液150mL，加50mL橄欖油，用高速組織搗碎機(jī)攪拌6min，即成乳白色聚乙烯醇橄欖油乳

4、化液，保存于低溫下備用。（3）溴甲酚紫溶液（100mg100mL）：準(zhǔn)確稱取0.01g溴甲酚紫加8mL蒸餾水?dāng)嚢枞芙?，轉(zhuǎn)入10mL容量瓶中，定容至10mL，備用。mLpH8.0的甘氨酸NaOH緩沖液，5mL聚乙烯醇橄欖油乳化液，將其放置40℃水浴預(yù)熱5min，然后精確加入1mL酶液，保溫10min，立即加入15mL乙醇終止反應(yīng)，加入酚酞指示劑2滴，用0.05molLNaOH滴定至紅色為終點(diǎn)。計(jì)算公式如下：ntVVmLU?????1000