茼麻子中巰基化合物的測定及對(duì)重金屬脅迫的應(yīng)答作用研究.pdf

1、生物細(xì)胞內(nèi)的含半胱氨酸殘基的肽類(像還原型谷胱甘肽,GSH)和蛋白質(zhì)(Prot-SH)等巰基化合物,具有抗氧化、促氨基酸吸收、重金屬解毒、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能，是在多種植物生理活動(dòng)中扮演重要作用的活性物質(zhì)。開發(fā)一種靈敏、簡便的分析方法，通過測定篩選富含巰基化合物的植物，探討與其生物學(xué)功能的相關(guān)性是目前研究的熱點(diǎn)之一。本研究利用能與半胱氨酸殘基的巰基進(jìn)行選擇性衍生化作用的衍生化試劑5,5?-二硫雙-2-硝基苯甲酸(DTNB),采用細(xì)胞破壁、

2、衍生化為一體的前處理方法，通過HPLC法和光譜法測定了茼麻子中GSH和含巰基蛋白質(zhì)(Prot-SH)中巰基的含量，發(fā)現(xiàn)茼麻子中有較高的GSH和Prot-SH含量分布。利用該分析方法測Cd2+、Cr3+、Pb2+、As3+、Fe3+、Cu2+等重金屬脅迫時(shí)茼麻子中GSH和Prot-SH的巰基含量變化，并結(jié)合ICP-MS測定，探討了不同重金屬脅迫時(shí)，茼麻子中GSH和Prot-SH的巰基應(yīng)答作用和重金屬吸附量的關(guān)系，同時(shí)探討了不同巰基化合物對(duì)

3、重金屬解毒和積累作用中所扮演的作用及機(jī)制，為進(jìn)一步研究利用草本植物生物修復(fù)重金屬污染的實(shí)際應(yīng)用提供重要的參考數(shù)據(jù)。
　　本研究分為四個(gè)部分：第一章緒論。概述了現(xiàn)階段草本植物茼麻子的研究狀況和細(xì)胞內(nèi)巰基化合物與重金屬作用的機(jī)理，并提出了茼麻子細(xì)胞中巰基化合物的檢測方法及其在重金屬積累與脅迫作用研究中面臨的問題，并概述了本研究主要的選題思路和研究內(nèi)容。第二章高效液相色譜法測定茼麻子中還原型谷胱甘肽(GSH)和總巰基(-SH)的含量。利

4、用柱前衍生化試劑5,5?-二硫雙-2-硝基苯甲酸(DTNB)，采用細(xì)胞破壁、衍生化同步進(jìn)行的提取方式，通過HPLC法選擇性測定了茼麻子中GSH和總巰基(-SH)的含量。對(duì)樣品前處理、色譜流動(dòng)相等色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，并建立了一種同步測定細(xì)胞內(nèi)含半胱氨酸殘基的巰基化合物的測定方法。測定結(jié)果表明；茼麻子中GSH和總巰基(-SH)三次測定均值分別為1.6053μmol/g和4.8759μmol/g，說明茼麻子含豐富的GSH和巰基蛋白。在優(yōu)化的條

5、件下，測定方法的回收率達(dá)101.58％和98.47%，檢測限分別為5.18μmol/L和6.23μmol/L。第三章光譜法測定茼麻子中還原型谷胱甘肽和總巰基的含量。本研究采用細(xì)胞破壁與衍生化為一體的樣品前處理方法，利用鄰苯二甲醛（OPA）和5,5'-二硫雙-2-硝基苯甲酸（DTNB）為衍生化試劑，通過熒光光譜法和UV-vis吸收光譜法，測定了苘麻子中還原型谷胱甘肽(GSH)和總巰基(-SH)的含量。測定結(jié)果表明：苘麻子中富含 GSH和總

6、巰基，含量分別為1.4637?mol/g和4.9810?mol/g，熒光光譜法和 UV-Vis分光光度法的方法檢測限為0.04698μmol/L和1.5152μmol/L,回收率范圍為99.69%?100.27%和99.44%?100.89%。第四章茼麻子中巰基化合物對(duì)外源性重金屬的應(yīng)答作用。究采用富含巰基化合物的茼麻子作為實(shí)驗(yàn)樣本，利用衍生化試劑DTNB，通過高效液相色譜柱前衍生化法，研究不同重金屬脅迫細(xì)胞時(shí)巰基化合物的應(yīng)答作用。主要