低氧誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的實(shí)驗研究及Notch信號通路對其生物學(xué)行為的影響.pdf

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition，EMT）是細(xì)胞失去上皮表型而獲得間質(zhì)特性。EMT在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，使腫瘤獲得向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力。有研究表明Notch信號通路參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化，還可以影響乳腺癌的發(fā)展。Notch信號通路可促進(jìn)腫瘤發(fā)生EMT。低氧是腫瘤微環(huán)境標(biāo)志性特征，但是Notch信號通路在低氧誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT和侵襲轉(zhuǎn)移的過程中

2、是否發(fā)揮作用以及發(fā)揮什么樣的作用，目前尚未清楚。
　　目的：1.探討缺氧微環(huán)境是否可以誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT現(xiàn)象。2.闡明Notch信號通路對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231生物學(xué)行為的影響，從而為臨床提高乳腺癌患者的生存率提供新思路。
　　方法：1.取乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MCF-7分別在常氧（21％）和低氧（3%）條件下培養(yǎng)，在倒置顯微鏡下觀察其生長情況，采用Western blot檢測EMT上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-

3、Cadherin、β-Catenin及間葉細(xì)胞標(biāo)志物Vimentein在乳腺癌細(xì)胞株的表達(dá)。DAPT（r-分泌酶阻斷劑）100μM處理前后的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231分別在常氧和低氧中培養(yǎng)一定的時間。2.(1)Western blot檢測Notch信號通路相關(guān)蛋白Notch1和Hey1的表達(dá)情況。（2）Cell Counting Kit-8(CCK-8)增殖實(shí)驗檢測Notch信號通路對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231生長情況的影響。(

4、3)Transwell小室基質(zhì)侵襲實(shí)驗檢測Notch信號通路對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231侵襲能力的影響。(4)劃痕損傷實(shí)驗觀察Notch信號通路對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231遷移能力的影響。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.分別在低氧和常氧中培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞Western blot檢測顯示：與常氧條件相比，MDA-MB-231細(xì)胞在低氧中24h、48h E-Cadher

5、in的表達(dá)均降低，β-catenin在24h表達(dá)降低。間質(zhì)標(biāo)志物48h Vimentin的表達(dá)增高（P＜0.05）。MCF-7細(xì)胞在低氧中培養(yǎng)24h E-Cadherin的表達(dá)降低，48h表達(dá)增高；β-catenin的表達(dá)變化無統(tǒng)計學(xué)差異；而在低氧中24h Vimentin的表達(dá)增高（P＜0.05）。2.（1）在常氧和低氧的條件下，r-分泌酶阻斷劑處理乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞后，均表達(dá)Notch1，Hey1的表達(dá)下降。（2）Not

6、ch信號通路抑制前后，常氧與低氧培養(yǎng)條件下，CCK-8增殖實(shí)驗檢測四組細(xì)胞的增殖速度為低氧組＞常氧組＞低氧r組＞常氧r組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（3）Transwell小室基質(zhì)侵襲實(shí)驗常氧組、常氧r組、低氧組、低氧r組四組細(xì)胞穿膜數(shù)分別為（3414±759.9578）、（1769±331.6364）、（3753±1014.9174）、（2490±926.5595）個，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（4）劃痕損傷實(shí)驗結(jié)果為

7、常氧組、常氧r組、低氧組、低氧r組四組細(xì)胞24h的遷移寬度分別為（346.6±119.005）、（242.4±94.257）、（562.8±90.536）、（321.6±27.860）；36h四組的遷移寬度分別是（667.4±49.320）、（343.4±66.150）、（855.6±85.386）、（476.4±110.085），有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：低氧可以誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT，使腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲能