果蠅北京張翅基因定位.pdf

1、在實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)了一個(gè)果蠅自發(fā)突變體。這個(gè)突變體的翅膀始終是張開(kāi)的，它不具有飛行能力，它的爬行，跳躍能力也受大了很大損傷。同時(shí)這個(gè)突變體的壽命也很短。我們把這個(gè)突變體命名為北京張翅即BeijingSpreadingWings(bsw)。 這個(gè)突變體的表型引起了我們極大的興趣。為了找到突變的基因，我們結(jié)合了好幾種方法來(lái)進(jìn)行基因定位。首先經(jīng)傳統(tǒng)的平衡染色體來(lái)進(jìn)行染色體水平的定位，我們發(fā)現(xiàn)這是一個(gè)位于2號(hào)染色體的突變。然后用2號(hào)染色體上均

2、勻分布的38個(gè)Pelement進(jìn)行了粗略定位。我們發(fā)現(xiàn)其中一個(gè)位于59B的Pelement插入與bsw的遺傳距離為0.4CM。因此粗略地把這個(gè)bsw定位在2號(hào)染色體59A-D這個(gè)位置。然后我們用59A-D這個(gè)區(qū)域內(nèi)的缺失品系進(jìn)行了缺失定位，我們找到了一個(gè)品系跟突變體雜交后得到突變表型的后代。 為了進(jìn)一步進(jìn)行精細(xì)定位，我們使用了SNPs精細(xì)定位的方法。我們用插入位點(diǎn)位于59B的一個(gè)Pelement品系與突變體雜交得到了F2個(gè)體18

3、，800只，在這個(gè)F2群體中我們找到了75個(gè)重組子。我們?cè)?9B附近通過(guò)直接測(cè)序的辦法找到了許多SNPs，我們選擇了其中7個(gè)可以進(jìn)行PCR-RFLP分析的SNPs。通過(guò)分析這75個(gè)重組子發(fā)生交換的位置我們把bsw定位在了2號(hào)染色體右端183547kb-183553kb這個(gè)范圍。我們針對(duì)這個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增測(cè)序。我們?cè)?83549kb找到了一個(gè)染色體變異，很有可能這就是造成這個(gè)突變體表型的分子基礎(chǔ)。這個(gè)染色體變異可能影響了它下游5kb

4、的twist基因和其他一些基因的功能。Twist基因和肌肉分化有關(guān)，這是與北京張翅突變體的表型是相符的。但我們用不包含twsit的缺失品系與這個(gè)突變體做互補(bǔ)測(cè)試卻沒(méi)有出現(xiàn)突變體的表型說(shuō)明這個(gè)染色體變異可能影響了其它基因的功能。這也可以解釋我們前面缺失品系進(jìn)行互補(bǔ)測(cè)試結(jié)果只有一個(gè)品系跟突變體雜交后得到突變表型的后代。 果蠅突變體定位一直以來(lái)是果蠅基因功能研究的限速步驟。最近出現(xiàn)了兩種新的定位方法，Pelement定位和SNPs定位