顯微鏡下多血管炎TLR-MyD88信號通路基因表達譜的研究.pdf

1、第一部分顯微鏡下多血管炎外周血單個核細胞TLR/MyD88信號通路基因表達譜的研究
　　目的：比較顯微鏡下多血管炎活動期患者和健康對照組外周血單個核細胞中TLR/MyD88信號通路相關(guān)基因的mRNA表達水平，從而篩選差異表達基因。
　　方法：采用病例-對照研究，篩選10例活動期顯微鏡下多血管炎（病例組）和10例健康對照人群（健康對照組）作為研究對象，收集患者的臨床資料。分離研究對象的外周血單個核細胞，提取總RNA之后逆轉(zhuǎn)錄合

2、成cDNA，采用基因芯片（人TLR通路免疫相關(guān)基因芯片）技術(shù)檢測TLR/MyD88信號通路相關(guān)基因的mRNA表達水平，使用熒光定量PCR(RT-PCR)方法驗證基因芯片結(jié)果。
　　結(jié)果：①顯微鏡下多血管炎活動期患者與健康對照組相比，84個TLR/MyD88相關(guān)基因中有23個基因有差異性表達，其中有13個基因表達量上調(diào)，分別是IRAK3（1.5倍，P=0.0205）、TLR4(1.57倍，P=0.0165)、TOLLIP(1.65倍

3、，P=0.0191)、 CXCL11(1.67倍，P=0.0461)、 FADD(1.83倍，P=0.0239)、 TLR6(1.93倍，P=0.0213)、IRF7(1.97倍，P=0.0498)、CD14(2.02倍，P=0.0454)、BCL3(2.02倍，P=0.0312)、TLR1(2.42倍，P=0.0280)、CXCL9(2.51倍，P=0.0498)、MUC1(3.11倍，P=0.0132)、IL10(10.17倍，P=

4、0.0367)，其中差異表達較明顯的是MUC1（3.11倍，P=0.0132）、IL10（10.17倍，P=0.0367）。有10個基因表達量下調(diào)，分別是CXCL10(-1.51倍，P=0.0404)、SARM1(-1.56倍，P=0.0121)、TLR10(-1.57倍，P=0.0499)、ATF3(-1.58倍，P=0.0034)、CIITA(-1.69倍，P=0.0237)、JUN(-1.86倍，P=0.0127)、 RIPK2(

5、-1.91倍，P=0.0131)、CHUK(-15.26倍，P＜0.0001)、IFNA7(-16.13倍，P＜0.0001)、SOCS1(-22.35倍，P＜0.0001)，其中差異表達較明顯的是CHUK(-15.26倍，P＜0.0001)、IFNA7(-16.13倍，P＜0.0001)、SOCS1（-22.35倍，P＜0.0001）。②RT-PCR驗證結(jié)果從23個有差異性表達的基因中隨機選取6個基因進行RT-PCR驗證，RT-PCR

6、技術(shù)檢測基因表達倍數(shù)變化分別為分別為MUC1（2.78倍，P=0.0392），BCL3(1.99倍，P=0.0138),IRF7(1.88倍，P=0.0116),IL10(2.91倍，P=0.0125),TLR10（-1.86倍，P=0.0203），JUN（-1.81倍，P=0.0408），驗證結(jié)果顯示基因芯片檢測的差異表達與RT-PCR檢測的差異表達趨勢一致。
　　結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)顯微鏡下多血管炎活動期外周血單個核細胞中多個TL

7、R/MyD88信號通路相關(guān)基因表達水平發(fā)生了變化，這些異常表達的相關(guān)因子涉及Toll樣受體、TLR負調(diào)控分子、接頭蛋白基因、與TLR相互作用的蛋白基因、TLR效應(yīng)因子基因、TLR信號通路下游基因、轉(zhuǎn)錄靶基因及炎癥細胞因子，表明TLR/MyD88信號通路可能是導(dǎo)致顯微鏡下多血管炎發(fā)病的一條重要免疫調(diào)節(jié)信號通路。
　　第二部分顯微鏡下多血管炎外周血中性粒細胞TLR/MyD88信號通路基因表達譜的研究
　　目的：比較顯微鏡下多血管

8、炎活動期患者和健康對照組外周血中性粒細胞中TLR/MyD88信號通路相關(guān)基因的mRNA表達水平，從而篩選差異表達基因。
　　方法：采用病例-對照研究，篩選20例活動期顯微鏡下多血管炎（病例組）和12例健康對照人群（健康對照組）作為研究對象，收集患者的臨床資料。分離研究對象的外周血中性粒細胞，提取總RNA之后逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，采用基因芯片（人TLR通路免疫相關(guān)基因芯片）技術(shù)檢測TLR/MyD88信號通路相關(guān)基因的mRNA表達水平，

9、使用熒光定量PCR(RT-PCR)方法驗證芯片結(jié)果。
　　結(jié)果：①顯微鏡下多血管炎活動期患者與健康對照相比，84個TLR相關(guān)基因中有18個基因有差異性表達，其中有13個基因表達量上調(diào)，分別是TRAF3（1.52倍，P=0.0237）、NFKB1(1.65倍，P=0.0086)、LY96(1.85倍，P=0.0002)、IRF7(1.93倍，P=0.0188)、IRAK4(1.93倍，P=0.0224)、TLR6(2.00倍，P=0

10、.0092)、CASP1(2.01倍，P=0.0032)、 TBK1(2.06倍，P=0.0145)、 IRAK3(2.50倍，P=0.0066)、TLR10(2.55倍，P=0.0048)、IL10(2.70倍，P=0.008)、JUN(2.90倍，P=0.0006)、MAPK14(3.06倍，P=0.0015)，其中差異表達最明顯的是MAPK14（3.06倍，P=0.0015）。有5個基因表達量下調(diào)，分別是TNRC5(-1.53倍，

11、P=0.0003)、TLR7（-1.85倍，P=0.0284）、SIGIRR(-2.10倍，P=0.0227)、 CIITA(-2.26倍，P=0.0205)、MAP3K7IP1（-2.28倍，P＜0.0001），其中差異表達最明顯的是MAP3K7IP1（-2.28倍，P＜0.0001）。②RT-PCR驗證結(jié)果從18個有差異性表達的基因中隨機選取4個基因進行RT-PCR驗證，RT-PCR技術(shù)檢測基因表達倍數(shù)變化分別為IL10（1.80倍

12、，P=0.0478），TLR10(2.50倍，P=0.0224),NF-KB1(5.27倍，P=0.0057)，TLR7(-10.65倍，P=0.0027)，驗證結(jié)果顯示基因芯片檢測的差異表達與RT-PCR檢測的差異表達趨勢一致。
　　結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)顯微鏡下多血管炎活動期患者外周血中性粒細胞中多個TLR/MyD88信號通路相關(guān)基因表達水平發(fā)生了改變，這些異常表達的相關(guān)因子涉及Toll樣受體、TLR負調(diào)控分子、凋亡相關(guān)基因、與TL