白藜蘆醇對膠質(zhì)瘤及其腫瘤微環(huán)境中星形細(xì)胞的影響.pdf

1、背景：膠質(zhì)細(xì)胞瘤（Glioblastoma,GB）是一種顱內(nèi)常見的惡性腦腫瘤，屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。世界衛(wèi)生組將其分為四個等級，高級別的膠質(zhì)瘤由于其惡性程度高，轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)，復(fù)發(fā)率高，所以很難徹底治愈。一般病人從開始接受治療到死亡，基本不會超過18個月。目前治療方法有手術(shù)摘除、放療、化療以及這幾種方法結(jié)合。雖然目前臨床上發(fā)現(xiàn)一些有效的治療藥物，但部分藥物本身存在毒性和副作用會更加加重患者身體負(fù)擔(dān)。因此，尋找一種安全有效無毒副作用的治療藥物

2、是目前急需解決的醫(yī)療難題。白藜蘆醇（Resveratrol，Res），作為天然存在于植物莖葉果實中的一種多酚類藥物，不僅具有保護(hù)心血管和廣譜抗菌的功效，還有抗氧化抗腫瘤的功效，無毒副作用，且能透過血腦屏障。星形膠質(zhì)細(xì)胞（Astrocytes，AS）是大腦內(nèi)大量存在且具有支持和保護(hù)神經(jīng)元等功能的結(jié)構(gòu)細(xì)胞。在腫瘤微環(huán)境中，膠質(zhì)瘤周圍的星形膠質(zhì)細(xì)胞會分泌一些生長因子和細(xì)胞因子等對膠質(zhì)瘤的生長有一定的影響。本實驗?zāi)康氖翘接懩[瘤微環(huán)境對膠質(zhì)瘤細(xì)胞

3、系RG2細(xì)胞的影響，主要研究RG2細(xì)胞與星形膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用關(guān)系，以及白藜蘆醇對二者的作用影響。
　　方法：（1）建立共培養(yǎng)體系：取新生24h內(nèi)的SD鼠大腦皮層細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，傳代純化，與膠質(zhì)瘤RG2細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)。加入80μM的白藜蘆醇處理48h。（2）應(yīng)用細(xì)胞計數(shù)儀器進(jìn)行細(xì)胞數(shù)量檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞和RG2細(xì)胞增殖情況。（3）應(yīng)用劃痕實驗，對貼壁細(xì)胞進(jìn)行機(jī)械損傷，檢測RG2細(xì)胞的遷移能力。（4）應(yīng)用qRT-PCR檢測星形膠質(zhì)細(xì)

4、胞中GFAP和STAT3在轉(zhuǎn)錄水平的變化；檢測RG2細(xì)胞中MMP2、MMP7和CyclinD1在轉(zhuǎn)錄水平的變化。（5）應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色和免疫熒光染色觀察細(xì)胞形態(tài)和檢測GFAP的表達(dá)。（6）應(yīng)用Western blot檢測星形膠質(zhì)細(xì)胞中GFAP和STAT3在蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）星形膠質(zhì)細(xì)胞和RG2細(xì)胞共培養(yǎng)后，二者細(xì)胞數(shù)量均增多。（2） qRT-PCR結(jié)果顯示，與單獨培養(yǎng)組相比星形膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)后，GFAP和STA

5、T3相對表達(dá)量增加。RG2細(xì)胞在共培養(yǎng)條件下，MMP2、MMP7和CyclinD1相對表達(dá)量均增加。（3）白藜蘆醇處理后，共培養(yǎng)體系中的星形膠質(zhì)細(xì)胞和RG2細(xì)胞數(shù)量均顯著減少。（4）免疫組化結(jié)果顯示，腫瘤周圍的星形膠質(zhì)細(xì)胞有GFAP的表達(dá)。免疫熒光結(jié)果顯示，共培養(yǎng)后，星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增多GFAP表達(dá)量增多；加入白藜蘆醇后，細(xì)胞數(shù)減少，GFAP表達(dá)量也減少。（5）qRT-PCR結(jié)果顯示，白藜蘆醇作用48h后，星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP和STAT

6、3相對表達(dá)量減少。RG2細(xì)胞MMP2MMP7和CyclinD1相對表達(dá)量減少。（6）Western blot結(jié)果顯示，白藜蘆醇作用后，共培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP和STAT3蛋白表達(dá)量減少。
　　結(jié)論：（1）體外環(huán)境下，星形膠質(zhì)細(xì)胞能夠促進(jìn)膠質(zhì)瘤RG2細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移，體現(xiàn)在細(xì)胞數(shù)量增多，MMP2、MMP7和CyclinD1上調(diào)。（2）共培養(yǎng)體系中，RG2細(xì)胞可以激活周邊的星形膠質(zhì)細(xì)胞，表現(xiàn)在GFAP表達(dá)升高，細(xì)胞增多。（3）白藜