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文檔簡介
1、脊髓損傷一般由于外界間接或者直接因素造成脊髓壓迫甚至斷裂,本實驗旨在通過建立大鼠脊髓損傷模型,研究硬脊膜切開對脊髓損傷的治療效果、手術(shù)時機及其治療機制進行初步探討。
本文主要分為以下幾個部分:
第一章:硬脊膜切開、脊髓切開對大鼠脊髓損傷療效觀察
目的:
建立大鼠脊髓損傷模型,觀察硬脊膜切開、脊髓切開對大鼠脊髓損傷的療效。
方法:
選取成年SD大鼠65只,體重200~250g,雌
2、雄不限。取5只打開椎板,不進行脊髓損傷,作為空白組,其余大鼠制作重度脊髓損傷模型,按隨機數(shù)字表法分為硬脊膜切開組(A組),脊髓切開組(B組),模型組(C組,打開椎板損傷脊髓不手術(shù)),每組各20只。
結(jié)果:
1、術(shù)后1d三組大鼠BBB評分均為0分,3d后大鼠運動開始恢復(fù),A組恢復(fù)較明顯,但三組評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義;7d、14d開始A組明顯高于B組,B組高于C組(p<0.05)。
2、術(shù)后MEP情況:術(shù)后1d三
3、組大鼠右后肢MEP潛伏期均較術(shù)前延長,此后開始緩慢恢復(fù)。14d后A組潛伏期小于B組、C組,B組小于C組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05),波幅增加不明顯。波幅自7d后開始恢復(fù),兩周后明顯,A組大于B組、C組,B、C組無差異。
3、脊髓含水量:術(shù)后1d,與正常值相比脊髓含水量明顯增加(p<0.01),其中C組數(shù)值最大,在術(shù)后各個測量時間點脊髓含水量均明顯高于A、B兩組,A組最低;3d后脊髓水腫現(xiàn)象最為嚴重,含水量最高,C組與其
4、余兩組相比差異顯著(p<0.01);術(shù)后7d脊髓水腫現(xiàn)象減弱明顯,含水量顯著下降,但依然顯著高于正常值(p<0.05);術(shù)后14d,各組大鼠脊髓水腫現(xiàn)象明顯好轉(zhuǎn)或基本消失,含水量接近正常值。
4、脊髓缺血面積:在術(shù)后1d,脊髓組織出現(xiàn)缺血現(xiàn)象,且C組現(xiàn)象最為明顯;術(shù)后3d,隨著脊髓水腫現(xiàn)象的加重,脊髓缺陷面積也達到最大;隨后大鼠脊髓組織逐漸恢復(fù),缺血面積也逐漸減小,在術(shù)后14d缺血面積顯著減小,呈現(xiàn)出逐漸消除的趨勢。
5、 結(jié)論:
1、硬脊膜切開及脊髓切開后可減輕脊髓損傷水腫程度,改善供血,利于肢體功能恢復(fù),以硬脊膜切開后更為明顯;
2、硬脊膜切開更有利于損傷區(qū)神經(jīng)元存活,減輕膠質(zhì)細胞增生及瘢痕形成,減少細胞凋亡。
第二章:硬脊膜切開術(shù)治療大鼠脊髓損傷時機的探討
目的:
觀察大鼠脊髓損傷后硬脊膜切開不同時間恢復(fù)情況,探討手術(shù)治療最佳時機。
方法:
健康成年清潔級SD大鼠60只,體重20
6、0-250g。實驗動物購進后進行常規(guī)飼養(yǎng),并觀察健康狀況及四肢活動有無異常,7天后開始實驗。大鼠按照上文使用的改良Allen's法制作重度脊髓損傷模型后,按隨機數(shù)字表法隨機分為A組(24h內(nèi)硬脊膜切開),B組(72h硬脊膜切開組),C組(對照組,損傷脊髓不手術(shù)),每組各20只。采用BBB運動功能評分法觀察1d、1w、2w、4w、6w后大鼠后肢功能恢復(fù)情況,各時間點大鼠后肢MEP波幅、潛伏期;TTC染色觀察各組損傷區(qū)缺血面積;對損傷部位行
7、H-E染色、NF-200、GFAP免疫組化染色觀察脊髓結(jié)構(gòu)變化,神經(jīng)元存活狀態(tài),及膠質(zhì)細胞演變情況。
結(jié)果:
1、BBB評分,術(shù)后1d評分均為0分,術(shù)后1w、2w各組大鼠后肢功能較為明顯恢復(fù)均大于C組(p<0.05);術(shù)后4w,A組評分明顯高于B組和C組(p<0.05)。
2、傷后1d三組潛伏期明顯延長,1w后開始逐漸縮小,A、B兩組明顯較C組變小差異有統(tǒng)計學(xué)意義;2w以后A組較B組縮小更為明顯,B組較C組
8、縮小明顯;1d后三組波幅均明顯變小,差異無統(tǒng)計學(xué)意義;2w波幅開始明顯增高,A、B兩組均較C組增大,A組波幅大于B組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
3、三組1d可見髓內(nèi)彌漫性出血,細胞大量壞死;2w出血完全吸收,脊髓結(jié)構(gòu)破壞,囊腔形成;6w纖維組織增生,瘢痕形成,C組較B組明顯,B組較A組明顯。
4、大鼠脊髓損傷后手術(shù)后2w,6w,A組NF-200細胞數(shù)均多于B組、C組;A組的GFAP陽性細胞最少,C組最多。<
9、br> 5、TTC染色情況:術(shù)后3組大鼠脊髓組織受損區(qū)域出現(xiàn)缺血現(xiàn)象;術(shù)后1w,各組脊髓缺陷面積差距最為明顯,其中C組面積最大,A組缺血面積最小;在術(shù)后2w,脊髓狀態(tài)好轉(zhuǎn),A組缺血面積比1w時顯著減小,同時小于B組。4w后各組缺血面積與2w比較無明顯變化。
結(jié)論:
硬脊膜切開術(shù)24h組較72h組更明顯改善供血,促進肢體功能恢復(fù),72h后手術(shù)仍有意義;
第三章:硬脊膜切開術(shù)治療大鼠脊髓損傷的機制探討
10、 目的:
轉(zhuǎn)錄組測序篩選脊髓損傷段差異表達基因,探討手術(shù)對脊髓損傷治療機制。
方法:
成年SD大鼠60只,體重200~250g,雌雄不限,按隨機數(shù)字表法隨機分為A組(硬脊膜切開組),B組(損傷脊髓不手術(shù)),C組(打開椎板不損傷脊髓)每組各20只,其中A組于脊髓損傷后24h時進行硬脊膜切開,B組在脊髓損傷后不進行硬脊膜切開手術(shù)。轉(zhuǎn)錄組測序分析差異基因情況;ELISA檢測并對比各組8h、1d、3d、7d、14
11、d的TNF-a、IL-1β、IL-6濃度;Western blot對比各組不同時間點AQP-4、NF-κB的表達;對比各組8h、1d、3d、7d各時間點自噬相關(guān)蛋白Beclin-1和LC3的表達及凋亡關(guān)鍵蛋白Caspase-3的表達。
結(jié)果:
1、差異基因:A1與B1之間上調(diào)表達的約76,下調(diào)表達的497個;A2與B2之間上調(diào)表達的約182,下調(diào)表達的182個;A3與B3之間上調(diào)表達的約27,下調(diào)表達的62個。差異基
12、因的功能涉及應(yīng)激反應(yīng)、離子通道、凋亡、信號傳導(dǎo)、炎性反應(yīng)、細胞代謝等諸多細胞生理過程。
2、硬脊膜切開對脊髓損傷后炎癥影響
IL-1β因子:A、B兩組在術(shù)后8h表達明顯增加,3d達高峰,以B組最為明顯;B組大于A組,A組大于C組(p<0.05)。在術(shù)后14d后,各組大鼠脊髓中IL-1β因子表達明顯減少,A、B組相接近(p<0.05)。IL-6因子:術(shù)后8h后開始升高,3d達高峰,B組高于A組,A組高于C組(p<0.0
13、5)。在術(shù)后14d后明顯下降,A、B兩組差別無統(tǒng)計意義(p<0.05)。TNF-α因子:在術(shù)后8h表達明顯增加,B組明顯高于A組(p<0.05)。在術(shù)后3d達高峰,B組高于A組,A組高于C組(p<0.05)。此后表達明顯下降。
3、硬脊膜切開對脊髓損傷后水腫影響
A、B組脊髓損傷后1dAQP-4蛋白表達開始增加,B組高于A組(P<0.05);3d時AQP-4蛋白表達高峰,A組表達量仍小于B組(p<0.05),此后各組
14、表達量逐漸下降(圖7)。NF-kB蛋白免疫印跡檢測:A、B兩組脊髓損傷后1d表達開始增加,以B組明顯(p<0.05);3d時達高峰,A組表達量小于B組(p<0.05);此后表達量下降。
4、硬脊膜切開對脊髓損傷后細胞自噬的影響
Western blot顯示,正常對照組脊髓組織中Beclin-1和LC3的蛋白含量較少,脊髓損傷后8h開始增加,1d后明顯增加,其中B組高于A組(p<0.05),在3d達高峰,其中A組低于B
15、組(p<0.05),此后逐漸開始下降。
5、硬脊膜切開對脊髓損傷后細胞凋亡的影響
Western blot結(jié)果顯示A組和B組脊髓組織Caspase-3的表達自脊髓損傷后8h即迅速上升,1d時B組高于A組(p<0.05);3d時表達達高峰,A組表達低于B組,A、B表達均高于C組(p<0.05);直到7d仍有較高表達。
結(jié)論:
1、硬脊膜切開術(shù)可能通過降低AQP-4蛋白表達減輕脊髓水腫;
2
16、、硬脊膜切開能夠減輕脊髓損傷區(qū)IL-1β、IL-6、TNF-α等炎癥因子的表達,減少炎癥反應(yīng);
3、硬脊膜切開可能通過抑制炎癥反應(yīng)中轉(zhuǎn)錄因子NF-kB表達,減輕炎癥反應(yīng)過程。
4、硬脊膜切開可減少自噬相關(guān)蛋白Beclin1和LC3的表達,減輕細胞自噬性損傷程度。
5、硬脊膜切開可減輕脊髓損傷后凋亡相關(guān)基因Caspase-3的表達,減輕細胞凋亡。
第四章:椎板減壓、硬脊膜切開、脊髓切開減壓治療脊髓損
17、傷的臨床觀察
目的:
觀察椎板減壓、硬脊膜切開、脊髓切開減壓治療脊髓損傷的效果,探討手術(shù)適應(yīng)、手術(shù)時機及治療機制。
方法:
以2013年1月至2016年9月本地區(qū)采用椎板減壓、硬脊膜切開減壓和脊髓切開減壓治療脊髓損傷患者23例,其中硬脊膜切開組10例、椎板減壓組12例、脊髓切開1例;采用美國脊髓損傷協(xié)會(America Spinal InjuryAssociation,ASIA)脊髓損傷分級,評價
18、手術(shù)療效。
結(jié)果:
術(shù)后MRI矢狀面T2WI像脊髓水腫信號消失,腦脊液高信號連續(xù)性恢復(fù);根據(jù)ASIA脊髓功能評價系統(tǒng),2例A級患者術(shù)后1例提高為B級,1例仍為A級,但感覺平面下降3個階段;橈側(cè)腕伸長短肌、中指指屈深肌、小指外展肌恢復(fù)1級;13例B級患者6例恢復(fù)為C,6例恢復(fù)至D;8例C級患者6例恢復(fù)為D級,2例恢復(fù)為E級。1例髓內(nèi)切開患者,術(shù)前為B級,術(shù)后恢復(fù)至C級。
結(jié)論:
脊髓損傷后脊髓水腫,
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