青島文昌魚肝細胞核因子BbHNF-3-1、BbHNF-3-2的克隆與表達.pdf

1、肝細胞核因子(hepatocyte nuclear factor，HNF)是調(diào)節(jié)肝臟內(nèi)基因特異性表達的一類轉(zhuǎn)錄因子，在肝臟、胰臟等與代謝有關(guān)的器官中較多表達，HNF家族主要包括CCAATP增強子結(jié)合蛋白(C/EBP)、HNF-1、HNF-3、HNF-4、D結(jié)合蛋白、HNF-6等六大類這些轉(zhuǎn)錄因子及其相互作用構(gòu)成的復雜調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，精確地控制著肝臟的發(fā)育和肝細胞的功能。肝細胞核因子3(HNF-3)基因編碼蛋白在調(diào)節(jié)新陳代謝以及代謝組織像肝臟、

2、胰臟的分化中起著關(guān)鍵作用。 文昌魚是無脊椎動物進化到脊椎動物的過渡類型的典型代表，一直被認為是研究脊椎動物起源和進化的模式動物。本文從青島文昌魚(Branchiostoma belcheritsingtauense)消化道cDNA文庫中，分離到具有完整編碼框的hepatocyte nuclearfactor3-1、3-2基因(BbHNF-3-1、BbHNF-3-2)，并對其序列特征、進化地位、克隆、生長激素(GH)的調(diào)控下基因

3、的表達水平變化等方面進行了研究。 首先，利用兼并引物和RACE技術(shù)克隆得到了具有完整編碼框的文昌魚的肝細胞轉(zhuǎn)錄因子BbHNF-3-1、BbHNF-3-2，并利用生物信息學方法對其基因結(jié)構(gòu)及系統(tǒng)進化地位進行分析。其中BbHNF-3-1 cDNA的最大開放閱讀框編碼404個氨基酸，BbHNF-3-2 cDNA的最大開放閱讀框編碼445個氨基酸。將BbHNF-3-1、BbHNF-3-2同其他HNF-3蛋白進行序列比對和系統(tǒng)進化分析發(fā)

4、現(xiàn)，它們和其它物種的HNF-3基因家族的成員一樣都包含一個110個氨基酸的DNA結(jié)合區(qū)，它位于HNF-3蛋白的中心位置。這個DNA結(jié)合區(qū)域由3個α螺旋和2個大環(huán)或者稱為翼的這樣幾個部分組成，所以將其命名為翼狀螺旋的DNA結(jié)合區(qū)，它可以結(jié)合到肝細胞特殊基因的調(diào)控區(qū)序列上，調(diào)控肝細胞功能基因表達。 哺乳動物的肝臟是HNF-3基因的主要合成器官，其他臟器如脾、腎、心、腸、肺、腦等也有合成。長期以來，文昌魚的肝盲囊一直被認為是脊椎動物

5、肝臟的前體。利用Northern blot技術(shù)檢測BbHNF-3在mRNA水平上在成體文昌魚中的組織表達模式，結(jié)果表明BbHNF-3基因在肝盲囊表達量較高，在后腸、鰓中也有少量表達，而在精巢、卵巢、肌肉、神經(jīng)管和脊索沒有雜交信號。可見HNF-3基因在成體文昌魚組織中呈組織特異性表達。 用生長激素(GH)處理文昌魚后，在肝盲囊中BbHNF-3-1的表達量沒有顯著變化，BbHNF-3-2的表達水平迅速升高，說明GH對BbHNF-3