青少年肌陣攣癲癇患者全外顯子組測(cè)序研究及其臨床意義.pdf

1、目的：
　　通過(guò)對(duì)確診為青少年肌陣攣癲癇（juvenile myoclonic epilepsy，JME)的患者進(jìn)行全外顯子組測(cè)序（whole-exome sequencing，W ES)，明確JM E患者的基因診斷，為JM E的發(fā)病機(jī)制及診療提供依據(jù)。
　　方法：
　　對(duì)2015年6月-2016年12月就診于第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科癲癇專科門(mén)診的確診為JM E的29例患者進(jìn)行WES，通過(guò)與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)及生物信息學(xué)分

2、析初步篩選基因突變位點(diǎn)，對(duì)該位點(diǎn)進(jìn)行一代驗(yàn)證和相關(guān)親屬驗(yàn)證，依據(jù)2015年美國(guó)醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)與基因組學(xué)學(xué)會(huì)（ACM G)聯(lián)合分子病理學(xué)學(xué)會(huì)發(fā)布的《序列變異解讀標(biāo)準(zhǔn)和指南》篩選出致病或可能致病的突變，明確這些JM E患者的基因診斷，并結(jié)合臨床用藥療效分析不同變異的治療效果。
　　結(jié)果：
　　在29例行W ES的JM E患者中，發(fā)現(xiàn)23例患者存在致病或可能致病的基因突變，共檢出21個(gè)突變位點(diǎn)（其中3例患者為同一位點(diǎn)突變)，包括20個(gè)

3、單基因錯(cuò)義突變和1個(gè)單基因移碼突變。在20個(gè)單基因錯(cuò)義突變中，CLCN2突變位點(diǎn)6個(gè)：c.1834G＞Ap.R612C，c.1991A＞T p.E664V，c.1141C＞G p.P381A，c.2006G＞A p.A669V， c.1141G＞C p.P381A，c.1705G＞A p.G569S；CACNA1H突變位點(diǎn)3個(gè)：c.1735G＞A p.D579N，c.5468G＞A p.R1823H，c.3646G＞A p.D1216N

4、；CHD2突變位點(diǎn)2個(gè)：c.927C＞G p.I309M，c.2291A＞C p.H764P；以下突變位點(diǎn)各1個(gè)：SCN2A c.1571G＞A p.R524Q， LAMC3 c.1675A＞G p.I559V， GRIN2A c.2636A＞G p.K879R， EFHC1 c.268A＞G p.M90V，CHRNA2 c.1073G＞T p.S358I，GABRA1 c.116C＞T p.T39I，CACNB4 c.1550C＞T

5、p+R5UQ, K C N n c.3317G＞Ap.R1106Q，CACNA1D c.2206A＞G p.M736V)。1個(gè)單基因移碼突變?yōu)镈 E P D C5 c.3225_c.3226insG p.V1076Gfs*85。發(fā)現(xiàn)6例患者基因突變的位點(diǎn)尚未見(jiàn)既往文獻(xiàn)報(bào)道，包括5例單基因錯(cuò)義突變（CZCN2 c.1834G＞A p.R612C，EFHC1 c.268A＞G p.M90V，GABRA1 c.116C＞T p.T39I，CA

6、CNB4 c.1550C＞T p.R517Q， CHD2 c.2291A＞C p.H764P)和1例單基因移碼突變（DEPDC5 c.3225_c.3226insG p.V1076Gfs*85)，5例單基因錯(cuò)義突變經(jīng)軟件預(yù)測(cè)結(jié)果顯示突變導(dǎo)致的蛋白質(zhì)翻譯的變化對(duì)蛋白功能均有影響，1例單基因移碼突變因?qū)е翫EPDC5基因編碼的蛋白從第1076位氨基酸開(kāi)始算起，后面再翻譯85個(gè)氨基酸即終止，且這85個(gè)氨基酸是移碼的，序列和原來(lái)的序列完全不同，

7、因此該位點(diǎn)突變風(fēng)險(xiǎn)較高，致病可能性較大。另有8例患者的突變基因?yàn)槟壳把芯繄?bào)道中與其他類型癲癇相關(guān)的基因，尚未見(jiàn)這些基因與JME發(fā)病相關(guān)的報(bào)道。6例 CLCN2基因突變的患者中，3例為肌陣攣發(fā)作（myoclonic seizures，M S)伴全面強(qiáng)直-陣攣發(fā)作（generalized tonic-clonic seizures，GTCS)，2例為 MS伴GTCS和失神發(fā)作（absence seizures， AS)，1例患者為單純MS。

8、這6例患者中，有4例患者接受丙戊酸治療，3例總發(fā)作減少100％，1例總發(fā)作減少75%-99%;2例患者接受左乙拉西坦治療，總發(fā)作減少均在50%-74%。發(fā)現(xiàn)5例患者存在CACNA1H基因突變，其發(fā)作類型均為M S伴GTCS，其中有2例患者接受丙戊酸單藥治療，3例接受雙藥聯(lián)合治療，所有患者的G T C S均減少100%，M S減少均在75%-99%，其中有2例患者曾在M S未得到控制時(shí)嘗試減藥，但均在減藥過(guò)程中（未完全停藥）出現(xiàn)GTCS。

9、
　　結(jié)論：
　　本研究在29例行W ES的JM E患者中發(fā)現(xiàn)23例患者存在致病或可能致病的基因突變，其中6例為新發(fā)現(xiàn)的突變，突變位點(diǎn)尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。另有8例患者的突變基因?yàn)槟壳把芯繄?bào)道的與其他類型癲癇（非JM E)相關(guān)的基因，推測(cè)JME可能和其他類型癲癇擁有共同的基因基礎(chǔ)。CACNA1H突變的JM E患者的表型可能多為M S合并GTCS，抗癲癇治療后G T C S較M S易得到控制，同時(shí)該類患者須慎重減停藥?？傊琖