胰腺實性假乳頭狀瘤全基因組外顯子測序及臨床病理研究.pdf

1、胰腺實性假乳頭狀瘤（pancreatic solid pseudopapillary neoplasm，SPN）是一種少見的具有惡性潛能的胰腺腫瘤。胰腺SPN發(fā)病率低，僅占胰腺腫瘤的1％-2％，多見于年輕女性。腫瘤起病隱匿，大部分患者無臨床癥狀，有癥狀的患者表現(xiàn)為腹部不適，惡心，嘔吐等，位于胰頭的SPN偶見黃疸。由于對此腫瘤的認識不斷加深和影像學技術(shù)的改進，胰腺SPN的檢出率在逐漸增加。胰腺SPN臨床少見，具有獨特的臨床表現(xiàn)和生物學行為

2、，然而目前相關(guān)基礎(chǔ)及臨床研究較少。
　　基因突變檢測目前已廣泛應(yīng)用于腫瘤的相關(guān)研究，對于揭示腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程起到了重要作用。新一代測序技術(shù)(next-generation sequencing technology,NGS)以高通量測序為特點，包括全基因組測序和外顯子測序。外顯子測序是指利用目標序列捕獲技術(shù)將基因組的全部外顯子區(qū)域DNA捕獲后并通過NGS技術(shù)進行測序的方法。其測序過程稱為“循環(huán)芯片測序法”，是對布滿DNA樣品的芯

3、片重復(fù)進行基于DNA的聚合酶反應(yīng)（模板變性、引物退火雜交及延伸）以及熒光序列讀取。外顯子測序針對性強，覆蓋度深，數(shù)據(jù)準確性高，具有簡便、經(jīng)濟、高效等優(yōu)點，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于腫瘤疾病的研究中。
　　本研究對胰腺SPN新鮮組織樣本提取DNA，構(gòu)建DNA文庫并進行高通量外顯子測序，初步篩選出突變基因共94個。進一步對突變基因進行生物信息學分析和Sanger測序驗證，證實CTNNB1是胰腺SPN的顯著突變基因。另對12個胰腺SPN腫瘤組織進

4、行擴大樣本PCR驗證，結(jié)果表明CTNNB1的突變率為93.3％(14/15)。針對CTNNB1編碼的β-catenin蛋白共進行了91例石蠟組織切片的免疫組織化學染色，共獲得有效染色87例，結(jié)果顯示共有72例組織切片為陽性，陽性率為82.8％(72/87)。相關(guān)性分析表明β-catenin免疫組化陽性表達程度與腫瘤直徑有相關(guān)性（P=0.029）。
　　此外，本研究回顧性分析2000至2010年之間所有接受手術(shù)并具有完整臨床病理資料

5、的病例。共入組100例病人，其中84例為女性，16例為男性，中位年齡31(13-68)歲。腫瘤平均直徑6.5(1.5-18) cm。共有24例患者診斷為惡性胰腺SPN。49例患者接受了淋巴結(jié)清掃，術(shù)后病理提示僅有4例患者有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。單因素分析表明，術(shù)前CT/MRI顯示胰周淋巴結(jié)腫大是惡性胰腺SPN的危險因素（P=0.025）。遠期隨訪結(jié)果顯示，共有兩名患者術(shù)后出現(xiàn)了肝轉(zhuǎn)移，并接受了肝轉(zhuǎn)移瘤切除術(shù)。兩名患者分別隨訪24和32個月，未出現(xiàn)