海洋微生物的拮抗菌篩選及一株抗酵母放線菌YT研究.pdf

1、對(duì)山東煙臺(tái)、青島等海邊地區(qū)采集的不同樣品(包括海水、海水泡沫、海砂、海泥、藻類、海洋無(wú)脊椎動(dòng)物和腐木等)，用平板稀釋法分離海洋微生物，共分離到細(xì)菌128株，放線菌36株和霉菌102株。以釀酒酵母、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、黑曲霉為測(cè)試菌，對(duì)上述菌株采用紙片法篩選產(chǎn)抗菌物質(zhì)的微生物，結(jié)果表明從海水泡沫和海泥分離出產(chǎn)抗菌物質(zhì)的細(xì)菌占從該類樣品分離總細(xì)菌株數(shù)比例高，分別為63.6％和55.0％：從海水和海洋無(wú)脊椎動(dòng)物中分離出產(chǎn)抗菌物質(zhì)的放線菌占

2、從該類樣品分離總放線菌株數(shù)比率高，各占50.0％；從腐木和海水泡沫分離出產(chǎn)抗菌物質(zhì)的真菌占從該類樣品分離總真菌株數(shù)比率高，分別為50.0％和45.5％。細(xì)菌和放線菌抗酵母比率高于其它類型測(cè)試菌，且抗枯草桿菌比率高于大腸桿菌，而真菌抗大腸桿菌比率高于枯草芽孢桿菌。 本文對(duì)一株分離自無(wú)脊椎動(dòng)物的放線菌YT進(jìn)行研究。經(jīng)過個(gè)體形態(tài)特征和培養(yǎng)特征可以初步鑒定為鏈霉菌屬(Streptomyces)的白孢類群(Albosporus)，16Sr

3、DNA序列和分子進(jìn)化樹表明其與GeneBank比對(duì)的菌株最大相似性僅有90％，其種屬歸類需進(jìn)一步研究?？咕V測(cè)定結(jié)果表明該菌株對(duì)白假絲酵母菌和釀酒酵母有較強(qiáng)的拮抗性。 為了提高抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量，對(duì)其培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。用杯碟法測(cè)發(fā)酵液的活性，篩選出最佳碳源為葡萄糖，最佳氮源為黃豆粉，Mg<'2+>和Ca<'2+>離子對(duì)抗菌物質(zhì)產(chǎn)生有促進(jìn)作用。Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)確定對(duì)產(chǎn)抗菌物質(zhì)的主要影響因素為葡萄糖、黃豆粉和N

4、aCl，中心組合實(shí)驗(yàn)確定培養(yǎng)基最佳組成為葡萄糖0.83％，黃豆粉1.24％，氯化鈉1.38％。同時(shí)選取幾個(gè)重要發(fā)酵工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明最佳接種量為8％，最佳裝液量為250mL 三角瓶裝量50mL ，最佳產(chǎn)抗生素溫度為25℃。 對(duì)菌株YT產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的理化性質(zhì)分析表明：該抗菌物質(zhì)對(duì)pH具有較好的穩(wěn)定性，而經(jīng)高溫和UV處理抗菌活性部分失活，且為非極性化合物。生物顯影和化學(xué)顯色確定了發(fā)酵液中存在兩種抗生素，而胞內(nèi)存在一種抗菌