IL-17影響白色假絲酵母菌感染人口腔黏膜上皮細(xì)胞的體外實驗研究.pdf

1、目的：體外建立白色假絲酵母菌(candida albicans C.a)感染入口腔黏膜上皮細(xì)胞(hOMECs)模型，探討人重組白介素17A(rhIL-17A)對hOMECs表達β-防御素(hBDs)、S100A8及LL-37的影響及其抑制C.a感染hOMECs的作用。
　　方法：1.觀察Ca感染hOMECs過程中rhlL-17A抑制C.a感染hOMECs的情況。進一步采用100μg/L rhlL-17A處理C.a24h后，激光共聚

2、焦顯微鏡下觀察rhlL-17A對C.a生長繁殖及形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。
　　2.探索不同濃度的rhlL-17A對hOMECs表達hBDs的影響:選用1、10、100、1000μg/L的rhlL-17A分別刺激hOMECs48h，采用ELISA和RT-PCR分別檢測hBD-1，2，3的蛋白及mRNA表達水平。
　　3.將細(xì)胞隨機分為4組:空白對照組;單獨C.a處理組（模型組）;單獨rhlL-17A處理組;rhlL-17A與C.a處理

3、組（實驗組）。用C.a感染hOMECs2h（感染復(fù)數(shù)MOI=0.1），建立C.a感染hOMECs模型，再用100μg/L的rhlL-17A處理hOMECs或感染C.a的hOMECs模型24 h，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，稀釋后重新接種到沙氏培養(yǎng)基中，通過數(shù)菌落數(shù)計算C.a黏附率。ELISA方法檢測上清液中hBD-1，2，3水平，RT-PCR檢測貼壁細(xì)胞的hBD-1，2，3、S100A8、LL-37的mRNA表達水平。
　　結(jié)果：1.C.

4、a感染hOMECs過程中，光鏡下可見C.a形成菌絲并感染hOMECs引起細(xì)胞死亡，而在rhlL-17A的作用下，實驗組中C.a無菌絲形成，無C.a感染hOMECs;激光共聚焦顯微鏡觀察到在rhIL-17A作用下的C.a生長繁殖停止，無菌絲及菌落形成。
　　2.與模型組比較，在rhlL-17A的作用下，C.a對hOMECs的黏附率降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3.RT-PCR結(jié)果顯示，10、100、1000μ

5、g/L的rhlL-17A均能誘導(dǎo)hOMECs表達hBD-2，分別與空白對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)差異，（P＜0.05），各濃度組兩兩比較均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。ELISA結(jié)果顯示，1、10、100、1000μg/L的rhlL-17A均能誘導(dǎo)hOMECs表達hBD-2，分別與空白對照組比較均有統(tǒng)計學(xué)差異，(P＜0.001)，各濃度組兩兩比較均具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.001)，100μg/L組hBD-2 mRNA水平及蛋白水平升高最為顯

6、著。
　　4.hOMECs中的hBD-2水平在C.a及100μg/L的rhlL-17A的誘導(dǎo)下呈表達上調(diào)，(P＜0.05)，rhlL-17A誘導(dǎo)能力高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，(P＜0.05);在C.a的激惹下，hBD-2表達水平均高于模型組和rhlL-17A組，（P＜0.05）。S100A8 mRNA、LL-37 mRNA水平在C.a的誘導(dǎo)下表達下降，(P＜0.05)，在rhlL-17A的刺激下呈表達上調(diào)(P＜0.05)，S1